[发明专利]铁线莲Blekitny Aniol组织培养及再生体系建立

摘要

本发明涉及铁线莲观赏品种‘蓝天使’(‘Blekitny Aniol’)组织培养繁殖方法。包括以下步骤：(1)外植体的消毒；(2)带芽茎段诱导增殖培养；(3)愈伤组织分化培养；(4)组培苗生根培养(5)炼苗与移栽。本发明通过对‘蓝天使’的不同外植体诱导培养的方法进行了改进，解决了增殖系数低，分化率低，生根困难等问题，通过本方法培养出的‘蓝天使’组培苗很大程度上提高了增殖系数、分化率和生根率，成活率可达90％。

主权项

1.一种铁线莲观赏品种‘蓝天使’的组织培养方法，所述方法包括如下步骤：(1)外植体选择与消毒过程；选取当年生长健壮的8‑15cm嫩茎，茎叶分开，对外植体进行4‑7min的消毒处理，得到1cm的茎段、带芽茎段和1cm×1cm的叶片；(2)侧芽诱导培养，将(1)中带芽茎段接种于侧芽诱导培养基进行培养，所述侧芽诱导培养基为在MS培养基中添加6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)1mg·L^‑1，萘乙酸(NAA)0.05mg·L^‑1，20‑25g·L^‑1蔗糖，6‑7g·L^‑1琼脂，并调节pH值为5.8‑6.0；(3)愈伤组织诱导培养，将(1)中叶片和茎段接种于愈伤组织诱导培养基进行培养；所述茎段愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)1mg·L^‑1，萘乙酸(NAA)0.1mg·L^‑1；叶片愈伤组织诱导培养基配方：在MS培养基中添加6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)2mg·L^‑1，2,4‑二氯苯氧乙酸(2.4‑D)0.05mg·L^‑1；两种培养基蔗糖和琼脂含量一致，20‑25g·L^‑1蔗糖，6‑7g·L^‑1琼脂，并调节pH值为5.8‑6.0；(4)愈伤组织分化培养，将(3)中诱导的愈伤组织接入分化培养基；培养基配方为：在1/2MS培养基中添加苯基噻二唑(TDZ)0.15mg·L^‑1，20‑25g·L^‑1蔗糖，6‑7g·L^‑1琼脂，并调节pH值为5.8‑6.0；(5)芽的继代增殖培养，将(1)和(4)中的芽接种至继代培养基，所述继代培养基配方：在1/2MS培养基中添加6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)3mg·L^‑1，萘乙酸(NAA)0.01mg·L^‑1，20‑25g·L^‑1蔗糖，6‑7g·L^‑1琼脂，并调节pH值为5.8‑6.0；(6)生根培养过程中，将(5)中高2‑3cm的组培苗接入生根培养基中进行诱导生根培养，获得组培苗；所述生根培养基为在1/2MS培养基中添加萘乙酸(NAA)0.05mg·L^‑1，将蛭石作为支撑物每瓶40‑50g，20‑25g·L^‑1蔗糖，并调节pH值为5.8‑6.0；(7)在(6)生根培养结束后，取出组培苗直接移植到基质中，在苗上加盖一次性透明杯进行覆盖保湿，保持空气湿度在80‑90％，正常养护。