[发明专利]一种人纤维蛋白原的制备方法

摘要

本发明以人血为原料，制备人纤维蛋白原，其粗提物经赖氨酸处理，将赖氨酸加入PEG‑1000沉淀抽提液，用1.2mol/L的乙醇冷乙醇初次沉淀，得粗制品，再经酸沉淀，提高了生物活性和溶出速度，经两次凝胶吸附，初次过CG‑6树脂，吸附沉淀中人凝血因子VIII，再经凝胶柱Toyopeal DEAE‑650M层析，吸附杂蛋白，提高了纤维蛋白原的纯度，最后经两次甘氨酸沉淀，得到人纤维蛋白原制品，经脂包膜病毒灭活和干热病毒灭活两步病毒灭活步骤处理，保证了血液制品在病毒传播方面的安全，加入甘油三酯、卵磷脂，复溶后在溶液中形成胶束，增大人纤维蛋白原的溶解度，海藻糖溶液作为非渗透性保护剂，保护了人纤维蛋白原冻干时的干燥损伤，也能使制品在人体内很好的载入细胞，促进凝血。

主权项

1.一种人纤维蛋白原的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：取新鲜人血浆按质量比10：1加入浓度为0.1mol/L的聚乙二醇‑1000，于35~37℃搅拌混合，于4℃离心，取沉淀按质量比1：8加入枸橼酸盐缓冲液抽提，取抽提液按质量比10：1加入赖氨酸，于2~4℃搅拌混合，得搅拌混合物；取搅拌混合物按质量比1：7~10加入浓度为1.2mol/L的乙醇，于1000r/min离心，取沉淀A，按质量份数计，取10~15份沉淀A、3~5份枸橼酸钠、4~6份盐酸精氨酸、0.4~0.9份氯化钠、70~90份注射用水混合，于25~30℃搅拌混合1~2h，得混合液，取混合液先于pH7.0~7.5，10~15℃过CG‑6树脂，振荡吸附2~3h，收集初级流穿液，再取初级流穿液于pH7~8，氯化钠溶液浓度为40~60mmol/L的条件下过Toyopeal DEAE‑650M层析柱，凝胶吸附3~5h，收集流穿液；取流穿液按质量比70~80：1：0.3~0.5加入聚山梨酯‑80、磷酸三丁酯，于23~26℃搅拌混合，得搅拌混合液，取搅拌混合液按质量比10：2：3加入甘氨酸、浓度为2mol/L氯化钠溶液混合，于10~15℃静置，离心，取沉淀，重复加入甘氨酸、氯化钠溶液，静置离心过程，取最终沉淀；取最终沉淀按质量比1：6加入枸橼酸盐缓冲液，于25~30℃搅拌混合，超滤，取超滤液，取超滤液按质量比100：0.25：1加入盐酸精氨酸混合，调节pH至6.5~7.5，经0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液浓缩，得浓缩物；按质量份数计，取20~30份浓缩物、15~20份甘油三酯、1~3份卵磷脂、120~150份水、12~15份浓度为50mmol/L海藻糖溶液，于280W超声，取超声液冷冻干燥，再于98~100℃干热灭活20~30min，得人纤维蛋白原。