[发明专利]一种基于高内涵系统的胚胎干细胞药物筛选方法

摘要

本发明公开了一种基于高内涵系统的胚胎干细胞药物筛选方法，其特征在于，包括：培养皿和孔板的处理，hESCs培养和传代，hESCs在培养体系中的处理和活细胞成像及数据处理。本发明通过建立一种基于高内涵系统的胚胎干细胞药物的筛选方法，通过集落面积间接反映细胞数量，同时，通过统计荧光面积/总集落面积反映细胞分化状态，避免高内涵分析前对细胞染色造成的结果误差，并增加了药物筛选的高效性和实用性。

主权项

1.一种基于高内涵系统的胚胎干细胞药物筛选方法，其特征在于，包括：(1)培养皿和孔板的处理溶解Vitronectin XF，在培养皿和孔板分别加入Vitronectin XF溶解液，室温静置不少于2h，铺细胞前吸掉上清液，后利用Celladhere稀释缓冲液清洗培养皿和孔板并晾干；(2)hESCs培养和传代将hESCs接种于步骤(1)中经VitronectinXF处理过的培养皿中，加入2‑5mL含Y‑27632的mTeSRTM1培养基，置于35‑40℃的恒温培养箱中；隔天更换所述含Y‑27632的mTeSRTM1培养基，利用Accutase酶消化传代；(3)hESCs在培养体系中的处理将步骤(2)中经所述Accutase酶消化传代后的hESCs细胞，利用药物筛选培养基将hESCs细胞稀释成5‑8×103/mL，加入到步骤(1)中经Vitronectin XF处理过的孔板中的培养孔中，轻轻吹打混匀，并利用所述药物筛选培养基进行培养；每隔2‑3天更换所述药物筛选培养基，培养5‑7天；(4)活细胞成像及数据处理将经步骤(3)培养后的hESCs置于高内涵系统中，对hESCs进行全自动成像；所述成像条件设置为：10倍物镜明场，激发光为650～760nm；10倍物镜绿色荧光，激发光为488nm，接受光为500～550nm；利用Harmony 3.5.2软件对每孔中的不同部位进行随机拍摄，并对hESCs集落总面积、荧光面积和数据进行统计。