[发明专利]一种头孢菌素酰化酶固定酶的制备方法及其装置

摘要

本发明公开了一种头孢菌素酰化酶固定酶的制备方法及其装置，属于生物技术领域，所述方法包括(1)将复合油相溶液和复合水相溶液乳化制备三维弹性载体；(2)利用3‑二甲氨基丙胺对三维弹性载体进行活化，增加对酶的粘附力；(3)利用葡聚糖二乙醛对头孢菌素酰化酶、三维弹性载体进行交联修饰；(4)对交联修饰酶进行梯度升温后处理。总之，由本发明制备的头孢菌素酰化酶固定酶具有酶结合力强且稳定性好、机械性能强、酶活性高、半衰期长等优点。

主权项

1.一种头孢菌素酰化酶固定酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)三维弹性载体的制备：将复合油相溶液和复合水相溶液以体积比为1:1独立装入多功能温控水浴装置中，进行梯度进量搅拌，搅拌转速为400‑3000r/min，温度为2‑10℃，搅拌时间为4‑24h，同时，通入氮气进行超声波纳米微曝气，得到微珠乳液；将所述微珠乳液利用过滤膜进行过滤，取微珠，将所述微珠利用5倍体积比的去离子水反复冲洗3‑5次，得到湿微珠；再将所述湿微珠进行吸水干燥，冷冻存储，即得三维弹性载体；(2)三维弹性载体的活化：在使用前，先在所述三维弹性载体内加入体积比为1‑2倍，温度为30‑40℃的去离子水，保温3‑10min，进行润湿并解冻；然后再加入为剂量10‑30ml/kg的3‑二甲氨基丙胺，在30‑40℃温度下，以转速为60‑80r/min机械搅拌60‑90min，过滤，得到活化三维弹性载体；(3)酶的固定化：将所述活化三维弹性载体、葡聚糖二乙醛及浓度为250g/L的头孢菌素酰化酶溶液以质量比为60‑80:3‑4:20装入所述多功能温控水浴装置中，调节pH至7.5‑8.0，反应温度为45‑50℃，超声搅拌12‑14h，得到交联修饰酶；(4)交联修饰酶的后处理：以pH为7.5‑8.0的EMSA缓冲液冲洗所述交联修饰酶三次，每次1min，经滤膜过滤后，得到无杂交联修饰酶；将所述无杂交联修饰酶与浓度为50‑250mg/L的茶多酚按照质量比为1:2‑3的比例混合后，转移至多功能温控水浴装置中，以2‑4℃/h的升温速度逐步从室温升温至55℃，并以30‑60r/min的转速辅助超声搅拌，抽滤，收集固体，即得头孢菌素酰化酶固定酶。