[发明专利]一种从小鼠肠粘膜中分离纯化固有淋巴细胞的方法

摘要

本发明提供一种从小鼠肠粘膜中分离纯化固有淋巴细胞的方法，具体过程如下：获取动物小肠，经清洗、剪碎后置于离心管中，加入上皮剥离液搅拌剥离；移除上清液，加入中和液1，搅拌；移除上清液，加入中和液2，静置分离；移除上清液，加入消化酶混合液，搅拌消化；加入HBSS离心，移除上清后，用HBSS重悬后过滤；所得滤液离心后用Percoll液重悬后移至底部铺有Percoll液的离心管；离心，中间层细胞收集，离心，收集沉淀；用稀释后抗体混悬所得的细胞团，离心，收集沉淀；用流式缓冲液重悬沉淀，上机流式细胞仪得到ILC。该方法从小鼠肠粘膜中分离并纯化出固有淋巴细胞，获取细胞数量多、活率高、纯度高，为肠道黏膜免疫的研究奠定研究基础。

主权项

1.一种从小鼠肠粘膜中分离纯化固有淋巴细胞的方法，其特征在于，具体过程如下：1）获取动物小肠，经清洗、剪碎后置于离心管中，加入上皮剥离液搅拌剥离；2）移除上清液，加入中和液1，搅拌；3）移除上清液，加入中和液2，静置分离；4）移除上清液，加入消化酶混合液，搅拌消化；5）加入HBSS离心，移除上清后，用HBSS重悬后过滤；6）步骤5）所得滤液离心后用第一Percoll液重悬后移至底部铺有第二Percoll液的离心管；7）离心，取中间层细胞收集，再次离心，收集沉淀；8）用稀释后抗体混悬第7）所得的细胞团，离心，收集沉淀；9）用流式缓冲液重悬沉淀，上机流式细胞仪得到ILC。