[发明专利]餐饮食品中食源性致病菌的快速鉴定方法

摘要

本发明提了餐饮食品中食源性致病菌的快速鉴定方法，步骤为：1)DNA模板提取；2)引物筛选与反应体系优化：选取金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特菌的特异基因nuc，invA，prfA，利用分别设计引物对；3)PCR扩增：4)对菌株DNA进行PCR－DHPLC检测，只有与目标扩增吻合的菌株检测出扩增吸收峰，而其他非目标扩增菌均呈阴性。可一次性检测餐饮食品中三种食源性致病菌，节约时间，节约试剂耗材，简化操作程序避免过多的人为的误差，且灵敏度高。

主权项

1.餐饮食品中食源性致病菌的快速鉴定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)DNA模板提取：取餐饮样品，加入到增菌培养基中充分混匀，培养，得到样品菌悬液；然后，取标准菌株菌悬液和样品菌悬液，加入LB肉汤中，震荡培养，然后按照细菌基因组DNA提取试剂盒说明，提取模板DNA；2)引物筛选与反应体系优化：选取金黄色葡萄球菌、沙门菌、单增李斯特菌的特异基因nuc，invA，prfA，分别设计引物对；3)PCR扩增条件：多重PCR反应体系模板DNA：三种致病菌各2μL；nuc上下游引物10μmol/L 1.25μL，invA上下游引物3μmol/L 1.25μL，prfA上下游引物10μmol/L 1.25μL；MultiplexPCRMix 2:25μL；MultiplexPCRMix 1:0.12μL；体系终体积50μL；PCR反应条件：94℃预变性10min；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸60s，进行30个循环；72℃延伸10min，4℃保存反应产物；4)对菌株DNA进行PCR－DHPLC检测，只有与目标扩增吻合的菌株检测出扩增吸收峰，而其他非目标扩增菌均呈阴性。