[发明专利]一种油泥石油降解复合酶的制备方法与应用

摘要

本发明涉及一种油泥石油降解复合酶的制备方法与应用，制备方法步骤如下：（1）将醋酸钙不动杆菌菌体进行细胞破碎，离心，取上清液，制得石油降解酶液21^#；（2）将石油降解酶液21^#与甲酸脱氢酶混合，制得油泥石油降解复合酶。本发明首次将来源于醋酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus）菌的石油降解酶系与甲酸脱氢酶按比例混合后，发现其可应用于处理高浓度石油污染油泥中的石油降解与修复，不仅不需要进行硅藻土等吸附剂的固定化，而且可在短时间内使油泥中的石油减量，具有高效的石油污染处理能力，并且生产成本低，具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种油泥石油降解复合酶的制备方法，其特征在于，步骤如下：（1）将醋酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus）菌体进行细胞破碎，离心，取上清液，制得石油降解酶液21#；所述的醋酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus）的菌种保藏号为CGMCC No.3915；（2）将步骤（1）制得的石油降解酶液21#与甲酸脱氢酶按蛋白质的质量比1:（3～5）的比例混合，制得油泥石油降解复合酶；所述甲酸脱氢酶为甲酸脱氢酶CbFDH，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述甲酸脱氢酶CbFDH的制备步骤如下：（i）构建基因工程菌株大肠杆菌E.coli BL21‑fdh；（ii）将步骤（i）构建的基因工程菌株大肠杆菌E.coli BL21‑fdh按质量1%～2%的接种量转接至种子培养基中，在28～32℃、150 ～180rpm条件下种子培养10～12 h，制得大肠杆菌种子液；（iii）将步骤（ii）所述大肠杆菌种子液按质量4%～5%的接种量转接至发酵培养基，在28～32℃、150 ～180rpm条件下培养16～18 h，收集基因工程菌株大肠杆菌E.coli BL21‑fdh菌体，经细胞破碎，离心，收集上清液，制得甲酸脱氢酶CbFDH；所述步骤（iii）中，所述发酵培养基组分如下：蛋白胨 10 g/L，酵母提取物 5 g/L，Na2HPO4·12H2O 9 g/L，KH2PO4 6.8 g/L，(NH4)2SO4 3.3 g/L，葡萄糖 0.5 g/L，乳糖 2 g/L，MgSO4·7H2O 0.5 g/L，CaCl2 0.02 g/L，甘油按体积百分比计0.5 %。