[发明专利]一种微生物转化法制备达木林B的方法

摘要

本发明公开了一种微生物转化法制备达木林B的方法，包括孢子和种子制备、微生物转化、转化产物收集和分离纯化。本发明发现，转化原料为绞股蓝皂苷LI时，短刺小克银汉霉AS3.153菌株会将其基本都转化为达木林A；转化原料为绞股蓝皂苷L时，短刺小克银汉霉AS3.153菌株会将其基本都转化为达木林B。绞股蓝皂苷LI、绞股蓝皂苷L的C20位羟基的构型决定了短刺小克银汉霉AS3.153菌株的脱水选择性，短刺小克银汉霉AS3.153菌株对该位置的脱水具有选择性，可以选择性制备达木林A或达木林B，原料利用率高。

主权项

1.一种微生物转化法制备达木林B的方法，其特征在于，包括通过如下步骤：步骤S1，孢子和种子制备：将短刺小克银汉霉AS3.153菌株接种于斜面培养基上，置于28℃恒温培养7d，得到菌丝生长旺盛、孢子丰富的培养物；取适量孢子接入种子瓶，于28℃振荡培养24h，得到种子培养物；步骤S2，微生物转化：以5%的接种量将种子培养物转至转化瓶，28℃振荡预培养24h后加入绞股蓝皂苷L无菌水溶液，使绞股蓝皂苷L终浓度为0.2g/L，28℃振荡培养96h；步骤S3，转化产物收集：取转化培养物上清液，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取液，浓缩得到转化产物粗品；步骤S4，将转化产物粗品上样于正相硅胶柱，硅胶径高比为1:10，拌样硅胶占硅胶总量的1/10，干法装柱，拌硅胶上样；依次用体积比为40:1:2、20:1:2的二氯甲烷/甲醇/丙酮混合溶剂以12BV/h的速度梯度洗脱，分别洗脱8BV、8BV；收集20:1:2二氯甲烷/甲醇/丙酮洗脱7‑8BV的洗脱液浓缩干燥得到达木林B。