[发明专利]一种适用于木本植物内源激素测定的高效提取方法

摘要

本发明属于木本植物技术领域，公开了一种适用于木本植物内源激素测定的高效提取方法，称取柠檬叶，液氮速冻并研磨成粉末，加入甲醇溶液，放置4℃冰箱中过夜；加甲醇洗涤残渣，重复操作2次，合并上清夜；将过滤后的上清夜转入旋转蒸发瓶中，在36℃、弱光下减压蒸发至水相，取水相并用纯水洗涤旋转蒸发瓶1次；‑80℃冷藏10min后冻干；用pH＝3.0的PBS4ml溶解；用4ml的乙酸乙酯10ml离心管萃取3次，留酯相弃水相；将乙酸乙酯相转入旋转蒸发瓶中，在36℃、弱光下减压蒸发至干，用A泵流动相溶解过小柱；水相，冷藏后冻干，直接保存；用5mL流动相溶解，得ZT；在进行HPLC分析前样品分别过0.22μm的微孔滤膜，作为供试液。

主权项

1.一种适用于木本植物内源激素测定的高效提取方法，其特征在于，所述适用于木本植物内源激素测定的高效提取方法包括：步骤一，称取柠檬叶0.2g，液氮速冻并研磨成粉末，加入冷却的80％甲醇溶液10ml，放置4℃冰箱中过夜；步骤二，加80％甲醇5mL洗涤残渣，重复以上操作2次，合并上清夜；过0.45μm滤头；步骤三，将过滤后的上清夜转入旋转蒸发瓶中，在36℃、弱光下减压蒸发至水相，取水相并用纯水洗涤旋转蒸发瓶1次，合计大概6ml；‑80℃冷藏10min后冻干，得干粉；用pH＝3.0的PBS4ml溶解；步骤四，用4ml的乙酸乙酯10ml离心管萃取3次，留酯相弃水相；步骤五，将乙酸乙酯相转入旋转蒸发瓶中，在36℃、弱光下减压蒸发至干，用A泵流动相2mL溶解过Pak‑ODS‑C18小柱，5ml冲洗，得IAA、GA、ABA；取2ml冻存管保存，为分析前样品；步骤六，水相，‑80℃冷藏10min后冻干，后直接保存；步骤七，用5mL流动相溶解，得ZT；取2ml冻存管保存，为分析前样品；步骤八，在进行HPLC分析前样品分别过0.22μm的微孔滤膜，作为供试液。