[发明专利]靶向肝癌的自噬siRNA-Fingolimod共递送脂质纳米颗粒

摘要

本发明涉及制药领域，尤其是靶向递送药物制剂领域，具体涉及靶向肝癌的自噬siRNA‑Fingolimod共递送纳米载药系统、及其制备方法与用途。本发明公开了靶向肝癌的自噬siRNA‑Fingolimod共递送纳米载药系统。本发明公开了一种用于主动靶向肝癌的共载自噬蛋白beclin1的siRNA和FTY720的纳米载药系统LCP‑II‑sibeclin1‑FTY720的制备方法。药理学实验表明，本发明的纳米载药系统同时载有beclin1的siRNA和FTY720、主动靶向肝癌并递送进入肝癌细胞内、在肝癌细胞内酸性环境下释放，具有协抗肝癌的作用，具有开发抗肝癌药物的价值。

主权项

1.一种用于主动靶向肝癌细胞的共载自噬蛋白beclin1的siRNA和FTY720的脂质纳米颗粒，其特征在于：脂质纳米颗粒表面接有叶酸即FA，FA作为配体结合肝癌细胞表面高表达的叶酸受体起到主动靶向的作用；该脂质纳米颗粒的磷酸钙核即CaP core遇酸反应，起到在肝癌细胞内的酸性环境下释放的目的；而且该脂质纳米颗粒同时载有靶向自噬蛋白beclin1的siRNA和诱导肝癌细胞凋亡的FTY720，起到协同诱导肝癌细胞凋亡的目的；所述的脂质纳米颗粒按照如下方法制备：1)300μL的500mM的CaCl₂和100μL的2mg/mL的自噬蛋白beclin1的siRNA分散于15ml环己烷/表面活性剂Igepal CO‑520混合液中，体积比为71/29，以此制备油包水微乳液；2)接着，300μL的25mM的pH＝9.0的Na₂HPO₄分散于另外一个15ml环己烷/表面活性剂Igepal CO‑520混合液中，体积比为71/29，并加入200μL溶于三氯甲烷的20mg/mL的DOPA，以此来制备磷酸相；3)然后，将两者混合搅拌20分钟，将30mL无水乙醇加入到混合物中，并以12,000g离心20分钟以除去环己烷/表面活性剂；4)用乙醇洗涤2‑3次后，加入1mL氯仿，得到磷酸钙核即CaP core，然后储存在玻璃小瓶中；5)为了制备用于主动靶向肝癌的共载自噬蛋白beclin1的siRNA和FTY720的脂质纳米颗粒，将1ml CaP core，100μL的DOTAP/胆固醇以1：1、总浓度10mM和100μL的3mM的DSPE‑PEG‑FA混合，然后通过旋转蒸发除去氯仿；6)将残留的脂质通过薄膜水化法分散于含有1mM的FTY720的800μL生理盐水溶液中；7)通过挤压器中200nm、100nm的聚碳酸酯膜来回挤压5次，然后将得到LCP‑II纳米颗粒即LCP‑II NPs以10KDa的分子量截止值的HEPES缓冲盐水透析以除去未包封的FTY720，即得到一种用于主动靶向肝癌的共载自噬蛋白beclin1的siRNA和FTY720的脂质纳米颗粒；HEPES缓冲盐水组成为145mM NaCl和20mM HEPES，pH7.4。