[发明专利]一种快速诊断以色列急性麻痹病毒试纸及其应用

摘要

本发明公开了一种蜜蜂急性麻痹病毒抗体胶体金快速检测试剂条，包括支撑层，以及在所述支撑层上依次设置的加样垫、金标抗体释放垫、检测层和吸收层，所述金标抗体释放垫包埋有胶体金标记的以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白；所述检测层上设置有检测带和质控带，所述检测带固定有以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白，所述质控带固定有以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白抗体。本发明的试纸条特异性强，极大的降低了出现假阳性的概率，保证了试纸条特异性和灵敏度；安全性高，避免检测过程中复杂的病毒处理操作；操作简便快捷，本发明不需要专业的技术人员进行操作和专业仪器的辅助检测，检测结果直观易判定并且检测时间只需20min极为迅速。

主权项

1.一种蜜蜂以色列急性麻痹病毒抗体胶体金快速检测试纸条，包括支撑层，以及在所述支撑层上依次设置的加样垫、金标抗原释放垫、检测层和吸收层，其特征在于，所述金标抗原释放垫包埋有胶体金标记的以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白VP2；所述检测层上设置有检测带和质控带，所述检测带固定有以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白VP2，所述质控带固定有以色列急性麻痹病毒核衣蛋白VP2兔多克隆抗体；所述以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白VP2序列如序列表中序列2所示；所述以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白VP2是将序列表中序列1所示的核苷酸片段插入到pEASY载体中表达后纯化得到的；所述的支撑层为聚氯乙烯板；所述的加样垫为中速定性滤纸；所述的金标抗原释放垫为玻璃纤维素膜；所述的检测层为硝酸纤维素膜；所述的吸收层为玻璃纤维；所述检测试纸条的制备方法，其包括如下步骤：1)将包被浓度为0.1～1mg/mL的以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白VP2按2μL/cm的速度喷于检测层上作为检测带，将包被浓度为0.1～5mg/mL的以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白VP2兔多克隆抗体按1μL/cm的速度喷于检测带下方的检测层上作为质控带，37℃下干燥30min，从而制备检测层；2)制备金标抗原释放垫：以1:100‑3000的标记比例将待标记的以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白VP2加入到pH7.0～10.0胶体金溶液中，按1:10～500的比例用含0.1～5％BSA的0.001～0.1mol/L磷酸盐缓冲液稀释胶体金标记的以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白VP2，将稀释后的胶体金标记的以色列急性麻痹病毒核衣壳蛋白VP2液按100μL/cm²的速度喷于玻璃纤维素膜中，4℃低温真空干燥；3)组装支撑层、加样垫、制备金标抗原释放垫、检测层和吸收层。