[发明专利]一种用于假肉监测的检测方法

摘要

本发明涉及食品检测领域，公开了一种用于假肉监测的检测方法，其包括以下步骤：(1)样品DNA的提取；(2)根据牛、山羊、猪、鸡的线粒体基因，应用CLUSTALW1.83软件和BLAST软件进行序列比较，用Primer Premier 5.0设计一条公用上游引物，再根据种属间的差异设计各自的特异下游引物，建立反应体系，其反应体系为：25μL由10×SYBR Green I，3.0μL DNA模板，15μL Isothermal MasterMix Iso‑001，上游引物与4条下游引物各0.5μL组成。本发明的检测方法具有简便、高效、快速的特点。

主权项

1.一种用于假肉监测的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，样品DNA提取50mg肉组织用液氮研磨成粉，加入1mL细胞裂解液；样品在55℃恒温过夜；溶解产物转移至离心管，加入1mL的Tris饱和酚和1mL的8‑羟基喹啉，混匀轻摇10min后进行第一次离心后取第一水相，用第一水相1/2体积的Tris饱和酚萃取后进行第二次离心后取第二水相，加入第二水相1/2体积的氯仿，混匀30s后进行第三次离心取第三水相；将第三水相转移至另一离心管，用均为第三水相1/20体积、浓度为3mol/L的醋酸钠和无水乙醇沉淀后进行第四次离心，弃上清，得到的沉淀物用70％的乙醇清洗，干燥后溶于100μL TE缓冲液中得到DNA提取物，该提取物即为DNA模板，用超微量核酸蛋白分析仪测定模板DNA的质量和浓度；细胞裂解液为Tris‑HCl、乙二胺四乙酸、NaCl、蛋白酶K、十二烷基硫酸钠、核糖核酸酶组成的混合液，其中Tris‑HCI的浓度为50mmol/L、pH为8.0，乙二胺四乙酸的浓度为10mmol/L、pH为8.0，NaCl的浓度为100mmol/L，蛋白酶K的浓度150μg/mL，十二烷基硫酸钠的质量分数为2％，核糖核酸酶的体积为10μL；TE缓冲液的组成为10mL、浓度为1mol/L、pH为8.0的Tris‑HCl和2mL、浓度为500mmol/L、pH为8.0的乙二胺四乙酸混合，之后加水定容至1000mL，121℃高压灭菌20min；步骤二，根据牛、山羊、猪、鸡线粒体基因，应用CLUSTALW1.83软件和BLAST软件进行序列比较，用Primer Premier 5.0设计一条公用上游引物，再根据种属间的差异设计各自的特异下游引物，建立反应体系，反应体系为：25μL由10×SYBR Green I，3.0μL DNA模板，15μL Isothermal MasterMix Iso‑001，上游引物与4条下游引物各0.5μL组成。