[发明专利]一种检测2型猪链球菌的RPA方法、其专用引物和探针及用途

摘要

本发明提供了用于检测2型猪链球菌的RPA检测方法，其专用引物、探针及其在2型猪链球菌检测中的用途。所述检测方法、其专用引物和探针是基于2型猪链球菌cps2J保守序列设计，具有SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示寡核苷酸序列。本发明首次将新型恒温扩增技术RPA应用于2型猪链球菌的检测中，该方法模拟体内DNA复制的酶反应过程，依赖特定的酶和蛋白组合，包括重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶，对DNA模板进行扩增，在37℃的恒温下实现特定核酸序列扩增，扩增产物通过侧向层析试纸条实现可视化判别。本发明建立的检测方法灵敏度高，检测限可达102拷贝/反应；特异性强，与其他病原体无交叉反应；对硬件设备的要求低，且反应时间仅需15 min；无需对样品进行复杂处理。

主权项

1.一种用于检测2型猪链球菌的RPA专用引物，是根据2型猪链球菌cps2J基因保守序列设计的，所述2型猪链球菌cps2J基因保守序列具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列SEQ ID NO.1：ATGGAAAAAGTCAGCATTATTGTACCTATTTTTAATACGGAAAAGTACTTAAGAGAGTGTTTAGATAGCATTATTTCCCAATCGTATACTAATCTAGAGATTCTTTTGATAGATGACGGTTCTTCAGATTCATCAACGGATATATGTTTGGAATACGCAGAGCAAGATGGTAGAATAAAACTTTTCCGGTTACCAAATGGTGGTGTTTCAAACGCAAGGAATTACGGTATCAAAAATAGCACAGCAAATTATATTATGTTTGTAGATTCTGATGATATTGTTGACGGCAACATTGTTGAGTCCTTATACACCTGTTTAAAAGAGAATGATAGTGATTTGTCGGGAGGGTTACTTGCTACTTTTGATGGAAATTATCAAGAATCTGAGCTGCAAAAGTGTCAAATTGATTTGGAAGAGATAAAAGAGGTGCGAGACTTAGGAAATGAAAATTTTCCAAATCATTATATGAGCGGTATCTTTAATAGCCCTTGTTGCAAACTTTATAAGAATATATATATAAACAAAGGTTTTGACACTGAACAGTGGTTAGGAGAGGACTTATTATTTAATCTAAATTATTTAAAGAATATAAAAAAAGTCAGCTATGTAAACAGAAATCTTTATTTTGCTAGAAGAGGTATACAAAGTACTACAAATACGTTTAAAAAAGATGTTTTTATTCAATTAGAAAATTTAGAAGAAAAAACTTTTGATTTGTTTGTTAAAATATTTGGTGGACAATATGAATTTTCTGTTTTTAAAGAGACGCTACAGTGGCATATTATTTATTATAGCTTATTAATGTTCAAAAATGGAGATGAATCGCTTCCAAAGAAATTGCATATATTTAAGTATTTATACAATAGGCATTCTTTAGATACTCTAAGTATTAAACGAACGTCCTCTGTTTTTAAAAGAATATGTAAATTAATTGTTGCTAATAATTTGTTTAAAATTTTTTTAAATACTTTAATTAGGGAAGAAAAAAATAATGATTAA 。