[发明专利]一种基于数字PCR方法检测肉制品中牛源性成分含量的方法

摘要

本发明公开了一种基于数字PCR方法检测肉制品中牛源性成分含量的方法。该方法应用生物信息学手段，从15种动物基因组序列中筛选单拷贝基因序列，设计内参引物和牛源种属特异性引物。该方法基于微滴数字PCR技术对肉制品中的牛源性成分含量进行绝对定量分析，无需标准品，无需构建标准曲线，弥补了部分标准品不易获取的缺陷，同时也有效避免了标准品与样品之间的工艺差异产生的量值偏差，进而应用内参基因校正牛源种属特异性基因的百分含量，获得真实可信的食品掺假数值。本发明的检测方法在3h之内即可完成牛源性成分含量鉴定工作，具有简单易行、高效灵敏等特点，为动物源成分量化掺伪鉴定开辟了广阔前景。

主权项

1.用于鉴定牛源性成分含量的PCR扩增引物及探针引物，其特征在于，包括内参基因Ref‑1引物正向序列：5′‑AATGATGCACCTTGTGAAGATGA‑3′，Ref‑1反向序列：5′‑CCCCTCAAAACCCAGTTCTCT‑3′，Ref‑1探针序列：5′‑FAM‑AAAAGGCATTTGGTTGCG‑MGB‑3′；牛源种属特异性基因Cattle‑3引物正向序列：5′‑GACAGAATTCATCTTTCAGG‑3′，Cattle‑3反向序列：5′‑CCAGAGCTACAAGTGATG‑3′，Cattle‑3探针序列：5′‑FAM‑CTCCAGGTCCTCTTCTTCAGCC‑BHQ1‑3′。