[发明专利]一种促进油梨茎段诱导愈伤组织及无菌芽的方法

摘要

本发明公开了一种促进油梨茎段诱导愈伤组织及无菌芽的方法。本发明所述方法包括如下步骤：（1）外植体的选取；（2）外植体预处理；（3）消毒；（4）接种；（5）培养；（6）获得愈伤组织及再生芽。本发明具有以下有益效果：（1）利用油梨半童期茎段作为外植体进行组织培养，相对于成年态茎段，其再生芽的萌动率更高，且组织不容易坏死；（2）半童期的茎段较成年态茎段容易消毒，通过严格控制消毒剂的时间和浓度，以不达到影响诱导效果和破坏外植体的组织结构，通过本发明能将污染率控制在15%以下；（3）通过黑暗培养，7d即可诱导出愈伤组织，15d诱导出再生芽，再经过15d光照培养后愈伤组织活力较高，再生芽生长较快。

主权项

1.一种促进油梨茎段诱导愈伤组织及无菌芽的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（1）外植体的选取：从成年油梨植株上选取接穗，嫁接到实生苗上，次年，当实生苗上重新抽发出新的枝条时，取抽发出的新枝条中上部带腋芽的半木质化枝条，即半童期枝条；用消毒过的剪刀截取半童期枝条上健康且无病虫害的长茎段，茎段20cm长，直径0.5‑1cm；（2）外植体预处理：将上述选好的长茎段迅速带回室内，去掉叶片，用消毒剪刀剪成5‑8cm长段，置于干净的容器中，于自来水下流水冲洗30min；（3）消毒：将上述预处理后的长茎段置于灭菌过的超净工作台上，先用75%酒精消毒30s，然后用0.1%升汞消毒7min，接着用2%次氯酸钠溶液消毒10min，最后用无菌水冲洗4次；（4）接种：用灭菌手术刀将上述消毒过的长茎段两端各切掉0.5cm，然后将剩余的长茎段切成长度1cm的带腋芽的段，接种在培养基MS+0.5mg/L 6‑BA上；（5）培养：将上述接种后的培养基放置在无菌培养室中暗处培养13‑15天，之后转移到光照下培养；（6）获得愈伤组织及再生芽：光照培养30天后，获取愈伤组织及再生芽。