[发明专利]小分子诱导人脂肪干细胞分化为睾丸间质细胞的方法

摘要

本发明公开了一种完全利用小分子诱导人脂肪干细胞分化为睾丸间质细胞(LCs)的方法。该方法步骤如下，首先分离提取人脂肪干细胞并完成鉴定；然后采用特定培养基诱导人脂肪干细胞分化，同时在不同时间点向培养基中外加一定量小分子包括：SAG、22OHC、Li、PDGF‑AA、FGF2、Androgen、LH促进分化；最后采用手工剔除非睾丸间质细胞(ALCs)样细胞富集分化靶细胞(ADSC‑ALCs)，并完成鉴定。按照本发明方法诱导，可以成功将人脂肪干细胞分化为睾丸间质细胞，从而为采用细胞移植治疗睾酮缺乏症提供细胞来源。

主权项

1.一种小分子诱导人脂肪干细胞分化为睾丸间质细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：①将获得的人源脂肪组织通过I型胶原酶分离出脂肪干细胞，该I型胶原酶按照质量体积比0.1％加入到DMEM低糖(DMEM‑LG)培养基中，然后用含质量体积比为0.25％EDTA的胰酶消化获取传代培养的脂肪干细胞；②对获取的传代培养的脂肪干细胞进行流式细胞分析鉴定；③采用成脂诱导培养基诱导脂肪干细胞完成成脂分化鉴定；④采用成骨诱导培养基诱导脂肪干细胞完成成骨分化鉴定；⑤待脂肪干细胞完成步骤②‑④的鉴定处理后，对脂肪干细胞进行免疫荧光处理：于室温进行膜通透化处理后直接加入一抗4℃孵育过夜，然后加入二抗室温孵育，接着染色室温孵育；⑥将脂肪干细胞接种培养5天后，进行分化培养，在分化培养过程中加入小分子促进脂肪干细胞分化成睾丸间质细胞，小分子成分包括SAG、22OHC、Li、PDGF‑AA、FGF2、Androgen、LH，然后手工剔除非睾丸间质细胞(ALCs)样细胞，并富集分化得到的靶细胞(ADSC‑ALCs)，并完成对靶细胞的免疫荧光鉴定和逆转录PCR检测鉴定分析。