[发明专利]利用多功能胎盘组织处理装置提取胎盘中造血干细胞的方法

摘要

利用多功能胎盘组织处理装置提取胎盘中造血干细胞的方法，它涉及生物技术领域，具体涉及一种的胎盘组织的处理方法。本发明的目的是要解决常规胎盘细胞清洗、分离时胎盘组织开放处理容易污染，处理过程中人工耗时，处理不完全、组织间隙细胞获得少的问题。胎盘组织处理处理方法：一、清洗胎盘；二、破碎胎盘；三、胎盘造血干细胞收集，即完成胎盘用于分离干细胞前的组织处理。本发明主要用于对胎盘进行组织处理。

主权项

1.利用多功能胎盘组织处理装置提取胎盘中造血干细胞的方法，其特征在于利用多功能胎盘组织处理装置提取胎盘中造血干细胞的方法是按以下步骤完成的：一、清洗胎盘：①、胎盘处理装置的处理器筒体(8)下端与清洗液接收器的锥形处理液接收器(10)上端螺纹连接在一起，将无菌采集的胎盘放入处理器筒体(8)中，将无菌生理盐水通过封闭硅胶帽(5)注入处理器筒体(8)内，密封处理器筒体(8)；所述无菌生理盐水的体积与处理器筒体(8)的容积比为1:(16～40)；所述胎盘的体积与处理器筒体(8)的容积比为1:(10～20)；②、以处理器筒体(8)横放形式将连接管(6)和清洗液导流管(12)分别置于多功能电动支架的第一皮带(1)和第二皮带(3)的弧形部上；开启电动控制器(4)，使处理器筒体(8)以40～60rpm的速度逆时针转动，同时处理器筒体(8)纵向移动，且第一皮带(1)向上移动时第二皮带(3)向下移动，洗涤4min～6min；③、从多功能电动支架上取下处理器筒体(8)，并以封闭硅胶帽(5)在上形式竖直放置，打开清洗液止流阀(14)，排除清洗液，关闭清洗液止流阀(14)，将无菌生理盐水通过封闭硅胶帽(5)注入处理器筒体(8)内，密封处理器筒体(8)；所述无菌生理盐水的体积与处理器筒体(8)的容积比为1:(16～40)；④、以处理器筒体(8)横放形式将连接管(6)和清洗液导流管(12)分别置于多功能电动支架的第一皮带(1)和第二皮带(3)的弧形部上；开启电动控制器(4)，使处理器筒体(8)以40～60rpm的速度逆时针转动，同时处理器筒体(8)纵向移动，且第一皮带(1)向上移动时第二皮带(3)向下移动，洗涤4min～6min；⑤、从多功能电动支架上取下处理器筒体(8)，并以封闭硅胶帽(5)在上形式竖直放置，打开清洗液止流阀(14)，排除清洗液，关闭清洗液止流阀(14)，将质量分数为75％的酒精通过封闭硅胶帽(5)注入处理器筒体(8)内，密封处理器筒体(8)；所述质量分数为75％的酒精的体积与处理器筒体(8)的容积比为1:(15～30)；⑥、以处理器筒体(8)横放形式将连接管(6)和清洗液导流管(12)分别置于多功能电动支架的第一皮带(1)和第二皮带(3)的弧形部上；开启电动控制器(4)，使处理器筒体(8)以40～60rpm的速度逆时针转动，同时处理器筒体(8)纵向移动，且第一皮带(1)向上移动时第二皮带(3)向下移动，浸泡4min～6min；⑦、从多功能电动支架上取下处理器筒体(8)，并以封闭硅胶帽(5)在上形式竖直放置，打开清洗液止流阀(14)，排除消毒后的酒精，将无菌生理盐水通过封闭硅胶帽(5)注入处理器筒体(8)内，密封处理器筒体(8)；所述无菌生理盐水的体积与处理器筒体(8)的容积比为1:(16～40)；⑧、以处理器筒体(8)横放形式将连接管(6)和清洗液导流管(12)分别置于多功能电动支架的第一皮带(1)和第二皮带(3)的弧形部上；开启电动控制器(4)，使处理器筒体(8)以40～60rpm的速度逆时针转动，同时处理器筒体(8)纵向移动，且第一皮带(1)向上移动时第二皮带(3)向下移动，洗涤4min～6min；⑨、从多功能电动支架上取下处理器筒体(8)，并以封闭硅胶帽(5)在上形式竖直放置，打开清洗液止流阀(14)，排除清洗液，关闭清洗液止流阀(14)；二、破碎胎盘：胎盘剪碎底座的底座(15)代替清洗液接收器的锥形处理液接收器(10)与胎盘处理装置的处理器筒体(8)螺纹连接在一起，将4℃的无菌生理盐水通过封闭硅胶帽(5)注入处理器筒体(8)内，然后以底座(15)与附有平台的电磁搅拌机(2)面接触形式置于多功能电动支架上，开启附有平台的电磁搅拌机(2)，驱动磁力剪切刀(16)转动，转速为80～100rpm，处理5min～6min；所述4℃的无菌生理盐水的体积与处理器筒体(8)的容积比为1:(80～100)；三、胎盘造血干细胞收集：①、造血细胞/组织收集器的锥形收集液接收器(17)代替胎盘剪碎底座的底座(15)与胎盘处理装置的处理器筒体(8)螺纹连接在一起，以封闭硅胶帽(5)在上形式竖直放置，打开收集液止流阀(21)，收集富含造血干细胞的单细胞悬液，关闭收集液止流阀(21)；②、将胎盘组织酶解液通过封闭硅胶帽(5)注入处理器筒体(8)内，密封处理器筒体(8)，然后以处理器筒体(8)横放形式将连接管(6)和收集液导流管(19)分别置于多功能电动支架的第一皮带(1)和第二皮带(3)的弧形部上；开启电动控制器(4)，使处理器筒体(8)以40～60rpm的速度逆时针转动，同时处理器筒体(8)纵向移动，且第一皮带(1)向上移动时第二皮带(3)向下移动，处理10min～15min，从多功能电动支架上取下处理器筒体(8)，并以封闭硅胶帽(5)在上形式竖直放置，打开收集液止流阀(21)，收集富含造血干细胞的单细胞悬液；所述胎盘组织酶解液中溶剂为PBS缓冲液，溶质为低分子量肝素钠注射液、I型胶原酶、Ⅱ型胶原酶、IV型胶原酶和胰蛋白酶‑EDTA，且低分子量肝素钠注射液的浓度为(2～30)IU/mL，I型胶原酶的浓度为(0.05～0.5)mg/mL，Ⅱ型胶原酶的浓度为(0.05～0.5)mg/mL，IV型胶原酶的浓度为(0.05～0.5)mg/mL，胰蛋白酶‑EDTA的浓度为(0.05～0.25)mg/mL；所述胎盘组织酶解液的体积与处理器筒体(8)的容积比为1:(20～40)；③、将胎盘组织酶解液通过封闭硅胶帽(5)注入处理器筒体(8)内，密封处理器筒体(8)，然后以处理器筒体(8)横放形式将连接管(6)和收集液导流管(19)分别置于多功能电动支架的第一皮带(1)和第二皮带(3)的弧形部上；开启电动控制器(4)，使处理器筒体(8)以40～60rpm的速度逆时针转动，同时处理器筒体(8)纵向移动，且第一皮带(1)向上移动时第二皮带(3)向下移动，处理10min～15min，从多功能电动支架上取下处理器筒体(8)，并以封闭硅胶帽(5)在上形式竖直放置，打开收集液止流阀(21)，收集富含造血干细胞的单细胞悬液；所述胎盘组织酶解液中溶剂为PBS缓冲液，溶质为低分子量肝素钠注射液、I型胶原酶、Ⅱ型胶原酶、IV型胶原酶和胰蛋白酶‑EDTA，且低分子量肝素钠注射液的浓度为(2～30)IU/mL，I型胶原酶的浓度为(0.05～0.5)mg/mL，Ⅱ型胶原酶的浓度为(0.05～0.5)mg/mL，IV型胶原酶的浓度为(0.05～0.5)mg/mL，胰蛋白酶‑EDTA的浓度为(0.05～0.25)mg/mL；所述胎盘组织酶解液的体积与处理器筒体(8)的容积比为1:(20～40)；④、将PBS缓冲液通过封闭硅胶帽(5)注入处理器筒体(8)内，密封处理器筒体(8)，以处理器筒体(8)横放形式将连接管(6)和收集液导流管(19)分别置于多功能电动支架的第一皮带(1)和第二皮带(3)的弧形部上；开启电动控制器(4)，使处理器筒体(8)以40～60rpm的速度逆时针转动，处理4min～6min；从多功能电动支架上取下处理器筒体(8)，并以封闭硅胶帽(5)在上形式竖直放置，打开收集液止流阀(21)，收集富含造血干细胞的单细胞悬液；所述PBS缓冲液的体积与处理器筒体(8)的容积比为1:(10～20)；⑤、合并步骤三①～④收集的富含造血干细胞的单细胞悬液，即完成胎盘组织酶解分离干细胞提取；所述多功能胎盘组织处理装置包括多功能电动支架、胎盘处理装置、清洗液接收器、胎盘剪碎底座和造血细胞/组织收集器；所述多功能电动支架包括第一皮带(1)、附有平台的电磁搅拌机(2)、第二皮带(3)和电动控制器(4)，附有平台的电磁搅拌机(2)设置在电动控制器(4)上，第一皮带(1)和第二皮带(3)设置在电动控制器(4)两侧，在第一皮带(1)和第二皮带(3)上均设置弧形部，第一皮带(1)和第二皮带(3)同步逆时针轴向转动，但第一皮带(1)和第二皮带(3)上下移动呈反向；所述胎盘处理装置包括封闭硅胶帽(5)、连接管(6)、处理器盖(7)、处理器筒体(8)和两个挡板(9)，连接管(6)设置在处理器盖(7)顶部，连接管(6)的端口设置封闭硅胶帽(5)，处理器盖(7)的下端与处理器筒体(8)上端通过螺纹连接在一起，两个挡板(9)相对设置在处理器筒体(8)内壁上；所述清洗液接收器包括锥形处理液接收器(10)、200微米漏网(11)、清洗液导流管(12)、清洗液乳胶管(13)和清洗液止流阀(14)，200微米漏网(11)设置在锥形处理液接收器(10)内，在锥形处理液接收器(10)底端设置清洗液导流管(12)，清洗液导流管(12)末端密封连接清洗液乳胶管(13)，在清洗液乳胶管(13)上设置清洗液止流阀(14)；所述胎盘剪碎底座包括底座(15)和磁力剪切刀(16)，底座(15)上端开口、下端封闭，在底座(15)内底部上设置磁力剪切刀(16)；所述造血细胞/组织收集器包括锥形收集液接收器(17)、70微米漏网(18)、收集液导流管(19)、收集液乳胶管(20)和收集液止流阀(21)；70微米漏网(18)设置在锥形收集液接收器(17)内，在锥形收集液接收器(17)底端设置收集液导流管(19)，收集液导流管(19)末端密封连接收集液乳胶管(20)，在收集液乳胶管(20)上设置收集液止流阀(21)；当多功能胎盘组织处理装置用于清洗胎盘时，胎盘处理装置的处理器筒体(8)下端与清洗液接收器的锥形处理液接收器(10)上端螺纹连接在一起，以处理器筒体(8)横放形式将连接管(6)和清洗液导流管(12)分别置于多功能电动支架的第一皮带(1)和第二皮带(3)的弧形部上；当多功能胎盘组织处理装置用于破碎胎盘时，胎盘处理装置的处理器筒体(8)下端与胎盘剪碎底座的底座(15)上端螺纹连接在一起，以底座(15)与附有平台的电磁搅拌机(2)面接触形式置于多功能电动支架上；当多功能胎盘组织处理装置用于胎盘造血细胞/组织收集时，胎盘处理装置的处理器筒体(8)下端与造血细胞/组织收集器的锥形收集液接收器(17)上端螺纹连接在一起，以处理器筒体(8)横放形式将连接管(6)和收集液导流管(19)分别置于多功能电动支架的第一皮带(1)和第二皮带(3)的弧形部上。