[发明专利]一种血吸虫虫卵抗原的制备及纯化方法

摘要

本发明涉及一种血吸虫虫卵抗原的制备及纯化方法，采用腹部玻片法以日本血吸虫尾蚴感染新西兰白兔，饲养后解剖，取出肝脏组织用剪刀剪成细块状，加生理盐水破碎匀浆，过φ20cm的60‑120目铜筛，过φ20cm的160‑300目尼龙绢，收集300目上的血吸虫虫卵；加生理盐水，搅拌静止沉淀用吸管去杂，过φ20cm的200和300目尼龙绢，蒸馏水冲洗，收集300目上的虫卵研磨，低温冻干，石英研磨钵碾磨后过φ20cm的300‑400目铜筛，破碎匀浆，再用高速离心机，低温离心吸取上清液，得乳白色血吸虫虫卵抗原。采用本发明纯净血吸虫虫卵得率高，所得血吸虫虫卵中不包含大小接近的破碎肝组织、破碎虫卵，虫卵抗原中杂蛋白含量低。

主权项

1.一种血吸虫虫卵抗原的制备及纯化方法，具体步骤如下：1)30℃条件下，用野外采集的阳性钉螺逸放日本血吸虫尾蚴6h，采用腹部玻片法以1800‑2000条尾蚴/只人工感染新西兰白兔，饲养45d后解剖，取出肝脏组织；新西兰白兔单只重10kg；2)将步骤1)得到的肝脏组织的1/4，用剪刀剪成细块状，然后添加到500mL组织捣碎机杯中，加入400mL生理盐水，5000r/min破碎匀浆，每匀浆1min停机1min，重复3次，得匀浆液；3)将步骤2)制得的匀浆液依次通过直径为20cm的60、80、100和120目铜筛进行过滤，收集通过120目铜筛的肝组织滤液；4)将步骤3)收集的肝组织滤液依次通过直径为20cm的160、200和300目尼龙绢，收集300目尼龙绢上保留的血吸虫虫卵；5)将步骤4)收集的5g血吸虫虫卵放入500mL量杯，加入500mL生理盐水，搅拌1‑2min后静止沉淀15min，用吸管将生理盐水取出，除去悬浮杂质，重复3次，重复3次；6)将步骤5)处理的血吸虫虫卵依次通过直径为20cm的200和300目尼龙绢，用10‑20倍体积的蒸馏水冲洗，收集300目尼龙绢上保留的虫卵；7)将步骤6)处理的血吸虫虫卵于‑80℃低温冰箱冷冻24h，然后冻干24h，得血吸虫虫卵冻干粉；所述冻干条件为：冷井温度＜‑55℃，真空度低于0.001MPa；8)将步骤7)制得的血吸虫虫卵冻干粉以1g为单位，放至石英研磨钵中；在空气净化等级为十万级及以上环境下研磨成血吸虫虫卵粉末；石英研磨钵所处室内温度25±1℃，室内湿度＜20％；9)将步骤8)制得的血吸虫虫卵粉末，依次通过300目和400目铜筛，收集400目铜筛上保留的虫卵，得到纯净血吸虫虫卵粉末；10)将步骤9)制备的纯净血吸虫虫卵粉末用生理盐水配制成体积重量比为1％的悬浮液，倒入细胞匀质器中破碎匀浆1min，直至金黄色虫卵粉末变成乳白色液体，然后再用高速离心机，4℃条件下离心30min，吸取上清液，即得到乳白色血吸虫虫卵抗原。