[发明专利]一种植物生根粉的制备方法

摘要

本发明涉及农林业技术领域，尤其涉及一种植物生根粉的制备方法。本发明以五氧化二磷、二甲基甲酰胺、五肽[H‑Tyr‑Ile‑Tyr‑Thr‑Gln‑OH] 为原料，合成一种磺肽素类短肽生长调节物质，对植物生根具有调节作用，刺激植物林木移栽匡、果树花卉的扦插处细胞的增殖，促进有丝分裂，使愈伤组织恢复和分化，提高成活率，同时刺激胚性细胞的形成，可以正常地分化出子叶、胚轴、根和幼苗，提高植物耐受较高的夜温，也可提高基因转化的效率，其无毒，对植物细胞伤害较小，比较安全。

主权项

1.一种植物生根粉的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：（1）取十二烷基硫酸钠按质量比1：10加入双蒸水，于40~50℃搅拌混合30~50min，再加入十二烷基硫酸钠质量30~40%的亚硒酸钠、十二烷基硫酸钠质量20~30%的抗坏血酸，调节pH至5~5.4，磁力搅拌，再于300W超声振荡20~30min，静置，得静置混合液，取静置混合液按质量比20：0.01~0.03：100加入油菜素内酯、双蒸水混合，于30~45℃保持2~3h，得混合液；（2）取鲜海带按质量比10：100：1加入缓冲液、石英砂混合，于‑4~‑2℃研磨粉碎20~30min，挤压过滤，取滤液离心，收集上清液A，透析，得透析液，取透析液按质量比4：1加入硫酸铵，于2~4℃搅拌混合30~40min，离心，取上清液B按质量比5：4再加入硫酸铵混合，于‑20~‑15℃保持12~15h，取出，解冻至室温，离心，取沉淀按质量比1：5加入浓度为50mmol/L的TAE缓冲液中，调节pH至7.8~8.0，离心，取上清液C，冷冻干燥，得干燥粉末，取混合液按质量比8：5加入干燥粉末混合20~30min，干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒物A，备用；（3）取五氧化二磷按质量比1：1加入质量分数为70%的硫酸，于90~95℃搅拌混合20~30min，冷却，再加入五氧化二磷质量20~30%的二甲基甲酰胺混合，保持1~2h，得混合物A，取五肽[H‑Tyr‑Ile‑Tyr‑Thr‑Gln‑OH] 按质量比1：12：3加入二甲基甲酰胺、吡啶混合，于20~25℃搅拌20~30min，再加入二甲基甲酰胺质量20~30%的混合物A，保持10~12h，得混合物B；（4）取混合物B按质量比1：10加入浓度为0.02mol/L的K2HPO4/KOH平衡缓冲液中，过层析柱，收集层析液，冷冻干燥，得冻干粉，按质量份数计，取12~15份冻干粉、30~40份步骤（2）备用的过筛颗粒A、10~15份玉米秸秆、4~6份蛭石、0.2~0.5份过磷酸钙、0.6~0.8份腐殖酸、3~5份海藻酸钠混合30~40min，干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒物B，得植物生根粉。