[发明专利]一种催化效率提高的D,D-羧肽酶DacA突变体及其制备方法有效

专利信息
申请号: 201810311758.5 申请日: 2018-04-09
公开(公告)号: CN108410845B 公开(公告)日: 2020-09-04
发明(设计)人: 许菲;杨海泉;陈媛;卢潇;王浩坤;王拂祥;代瑶 申请(专利权)人: 江南大学
主分类号: C12N9/48 分类号: C12N9/48;C12N15/57;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/06;C12R1/19
代理公司: 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 代理人: 张勇
地址: 214122 江苏*** 国省代码: 江苏;32
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摘要: 发明公开了一种催化效率提高的D,D‑羧肽酶DacA突变体及其制备方法,属于遗传工程和酶工程领域。本发明公开了由大肠杆菌(Escherichia coli)BL21来源的D,D‑羧肽酶DacA为母本,基于酶结构解析确定关键位点及突变方式,经分子生物学技术进行定点突变而获得催化效率提高的DacA突变体。在此改造条件下,E.coli D,D‑羧肽酶DacA的突变体K113G催化效率常数kcat值提高最多,由6543.4s‑1提高至9428.1s‑1。利用此策略可以显著提高D,D‑羧肽酶DacA的催化效率,为其在代谢改造E.coli提高其胞外分泌水平等方面的应用提供了基础。此策略对其它酶的性质改造具有重要的指导意义。
搜索关键词: 一种 催化 效率 提高 羧肽酶 daca 突变体 及其 制备 方法
【主权项】:
1.一种D,D‑羧肽酶DacA突变体,其特征在于,以SEQ ID NO.1所示氨基酸序列为出发序列,将第113位赖氨酸残基替换为精氨酸、甘氨酸或组氨酸。
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