[发明专利]一种基于细胞组织培养筛选产甜菊糖苷菌株的方法

摘要

本发明提供一种基于细胞组织培养筛选产甜菊糖苷菌株的方法，属于微生物学领域。该方法先将甜叶菊的叶子用酒精进行表面消毒，取1‑2g表面消毒后的样本接种于牛肉膏蛋白胨培养基上，恒温箱培养，观察每天的生长现象；然后根据菌落形态的不同、颜色的不同和长出时间的先后，分别挑取菌落边缘的菌接于新的平板上进行划线培养；随后对已经纯化的菌株进行编号后，转至相应的斜面培养基上，恒温培养；待菌落生长成熟，转移放入4℃冰箱保存；再将其转入液体培养基中分离菌种；待观察到液体培养基中有明显的微生物生长现象时，离心，取上清液过滤除菌后得发酵处理液，用于高效液相色谱法检测代谢产物，从而筛选出产甜菊糖苷的菌株。

主权项

1.一种基于细胞组织培养筛选产甜菊糖苷菌株的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)甜叶菊采样：选定健康的、无病虫害的甜叶菊植株，分别对其根部、茎部及叶片进行样本采集；(2)样本的预处理：用酒精对甜叶菊的根部、茎部或叶片进行表面消毒；(3)细胞组织培养法分离植株内生菌：取1‑2g表面消毒后的样本接种于牛肉膏蛋白胨培养基上，于37℃恒温倒置培养24‑72h，观察每天的生长现象，直至得到菌落；(4)菌株的纯化和归类：根据步骤(3)所得菌落形态的不同、颜色的不同和长出时间的先后，分别挑取菌落边缘的菌株，接种于新的牛肉膏蛋白胨培养基上，对新的培养基进行编号归类并恒温培养；(5)菌株的斜面培养及保存：将步骤(4)纯化后的菌株对应转至斜面培养基上，恒温培养，待菌落生长成熟后，转移放入4℃下冷藏保存；(6)菌株的糖发酵：将冷藏保存的菌种对应接种至液体培养基中，于37℃或28℃恒温培养24‑48h，每个液体培养基留一组空白作为对照；(7)菌株代谢产物分离：待观察到液体培养基中有明显的微生物生长现象时，将其离心，取上清液，过滤除菌后得发酵处理液；(8)高效液相色谱法检测甜菊糖苷：采用高效液相色谱法检测发酵处理液中的甜菊糖苷，当检测到甜菊糖苷时，对应的步骤(4)中的纯化菌株即为产甜菊糖苷的菌株。