[发明专利]一种黑枸杞不定芽途径高效诱导多倍体的方法

摘要

本发明提供一种黑枸杞不定芽途径高效诱导多倍体的方法，其是根据秋水仙碱处理浓度和处理时期，直接利用组培无菌苗的幼嫩叶片再生出不定芽进行多倍体诱导，不仅操作方便简易，最重要的是还可以大大提高诱变效率，降低嵌合体比率，进而大量获得多倍体材料，以解决现有方法不易高效获得纯合四倍体的问题，对育种研究以及大规模生产均具有重要意义。本发明是直接利用组培无菌苗的幼嫩叶片再生出不定芽进行多倍体诱导，黑果枸杞叶片离体多倍体诱导最佳的处理时期及处理浓度可大大提高诱变效率，降低嵌合体比率，本发明的技术方案中，不定芽的出苗率可达94.1％，四倍体苗获得率最高可达42.9％。

主权项

1.一种黑枸杞不定芽途径高效诱导多倍体的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、剪取黑果枸杞无菌苗从上至下第4‑5片幼嫩叶片，剪去叶片两端获得伤口后接种于叶片分化培养基中预培养，至叶片膨大生长出少量绿色愈伤组织；其中，叶片分化培养基的成分为：MS基本培养基+0.1mg/L 6‑BA+0.1mg/L NAA+0.5mg/L KT；S2、将获得的带愈伤组织的叶片转移至含1％(v/v)的DMSO和秋水仙碱的液体叶片分化培养基中进行多倍体浸泡诱导，秋水仙碱浓度为50‑150mg/L，避光黑暗条件处理1‑2天；然后使用无菌水清洗叶片后转入上述叶片分化培养基，继续22‑26℃光照培养至长出不定芽；S3、将加倍过后的不定芽转入生根培养基中，22‑26℃生长至不定芽高度达到3cm时进行多倍体检测，以获得多倍体再生植株；其中，生根培养基的成分为：1/2MS基本培养基+0.1mg/L IBA。