[发明专利]一种可检测热原的单克隆细胞系的制备方法有效
| 申请号： | 201810317034.1 | 申请日： | 2018-04-10 |
| 公开（公告）号： | CN108707626B | 公开（公告）日： | 2021-10-01 |
| 发明（设计）人： | 方敏;李凯莉;王滔;徐赫男;姜威;李晶;刘文军;段学锋 | 申请（专利权）人： | 中国科学院微生物研究所;安徽大学;中国科学院上海生命科学研究院湖州营养与健康产业创新中心 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 北京律和信知识产权代理事务所(普通合伙) 11446 | 代理人： | 武玉琴;刘国伟 |
| 地址： | 100101 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种可检测热原的单克隆细胞系的制备方法。该方法主要通过慢病毒构建稳定细胞系的方式，使得在NF‑κB反应元件或者IFN‑β启动子控制下的荧光素酶基因稳定表达在人上皮细胞A549细胞中，然后通过流式筛选得到单克隆，进一步筛选对LPS有反应的阳性克隆子，最后使用细菌内毒素标准品刺激并同时和鲎试剂进行比较，从而建立了一种新的使用上皮细胞系检测热原的方法。所述的上皮细胞系检测热原的方法不需要使用动物就能够真实地模拟人体对热原的反应，并且能够对的分布范围极为广泛的LPS有较强的反应，灵敏度高，稳定性好，而且A549细胞市售易得使该热原检测方法简单易行。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 单克隆 细胞系 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种可检测热原的单克隆细胞系的制备方法，其特征在于，包括：(1)将NF‑κB或者IFN‑β基因组装到可表达嘌呤霉素的慢病毒表达载体中，构建含有NF‑κB基因的重组质粒；(2)将步骤(1)得到的重组质粒稳定转染到上皮细胞系中；(3)将步骤(2)得到的上皮细胞系使用嘌呤霉素筛选，并用流式分选单克隆细胞；(4)将步骤(3)得到的单克隆细胞使用高剂量的LPS刺激，其中对LPS有反应的则为NF‑κB或者IFN‑β阳性克隆；(5)将步骤(4)得到的阳性克隆使用更低剂量的LPS刺激，得到极灵敏的阳性克隆细胞。
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