[发明专利]一种快速筛选高产洛伐他汀红曲霉的方法

摘要

本发明公开了一种快速筛选高产洛伐他汀红曲霉的方法，利用微孔板高通量培养技术（固态及液态）培养红曲霉，同时基于酶标仪以双波长法（△A=A238‑A247）快速检测发酵液中洛伐他汀含量。相比于常规平板培养和摇瓶发酵，本发明中所述的微孔板高通量培养技术试样量小、一次性可处理样品种类多，且节省空间，培养箱利用率高；对于高产洛伐他汀菌株的快速筛选，相比于液相色谱法，本发明实验周期大大缩短；相比于文献中所报道的比色法（单波长或双波长），本发明更能排除发酵液中其他物质的干扰。总之，整个过程可同时对上百株红曲霉进行快速培养和筛选，整个过程工作量小，操作快速便捷，易于实现。

主权项

1.一种快速筛选高产洛伐他汀红曲霉的方法，其特征在于：以微孔板高通量培养技术培养红曲霉，同时基于酶标仪以双波长法快速检测发酵液中洛伐他汀含量，具体包括以下步骤：（1）红曲霉固态培养：取1.5mL PDA培养基于24孔微孔板中，将红曲霉在PDA固体培养基上进行单菌落点种并培养6~7d；（2）孢子液的洗脱：在培养后的微孔板中每孔加入0.5~0.7mL生理盐水，于恒温振荡器中30℃、1200r/min 振荡5min，使孢子洗脱下来；（3）种子液的培养：取上述孢子液接种于每孔装有5mL的液体种子培养基的24孔深孔板中，孢子液接种量为4~10%（v/v），在28~30℃、300r/min条件下培养36~48h；（4）发酵液的培养：将步骤（3）培养后的种子液接入每孔装有5mL的液体发酵培养基的24孔深孔板中，种子液接种量为2~4%（v/v），在28~30℃、300r/min条件下培养6~7d；（5）双波长法检测：在24孔深孔板中每孔加入0.2mL步骤（4）培养得到的发酵液和3.8mL的70wt%乙醇，在500r/min、60℃条件下旋转震荡2h，震荡后用孔板离心机4000r/min离心30min；取上清液于96孔板中，于酶标仪上进行双波长检测，检测波长为△A=A238‑A247；以洛伐他汀标品为对照绘制双波长标曲，计算样品中洛伐他汀含量。