[发明专利]一种IgY的纯化方法

摘要

一种IgY纯化方法，包括以下步骤：用IgY免疫双峰驼通过噬菌体展示、生物亲和淘选获得到抗IgY的纳米抗体；取4FF凝胶填料2‑4g，依次用体积比为20％、50％、70％的DMSO溶液清洗，并用水清洗抽干；之后依次加入DMSO、NaBH4、NaOH和环氧氯丙烷，得到填料混合物；将上述纳米抗体与Na2CO3溶液，与上述得到的填料混合物偶联；偶联结束后加入Glycine甘氨酸，再用10‑20倍柱床体积的NaCl溶液清洗柱子，获得偶联了纳米抗体的亲和柱；将需要纯化的IgY样品加入纳米抗体亲和柱中偶联，结束后用PBS清洗柱子；最后用甘氨酸盐酸将IgY从柱子上洗脱下来，随即对洗脱下来的IgY用PH＝8.0的甘氨酸盐酸进行中和，避免IgY在酸性条件下失去活性，到此步骤已获得高纯度的IgY。

主权项

1.一种IgY纯化方法，其特征在于：包括步骤如下：①、利用IgY作为抗原免疫双峰驼，免疫结束后通过噬菌体展示、生物亲和淘选获得抗IgY的纳米抗体，并将该纳米抗体纯化至浓度为0.5mg/mL以上；②、取4FF凝胶填料2‑4g，依次用体积比为20％、50％、70％的DMSO溶液清洗3‑10分钟，即二甲基亚砜溶液，然后用蒸馏水清洗填料，再用真空抽滤装置将水抽干，抽5‑8分钟；③、在步骤②处理后的填料中依次加入2‑4mL体积比70％的DMSO，2‑4mL浓度为2mg/mL的NaBH4，3‑5mL浓度为0.8mol/L的NaOH和1‑1.8mL环氧氯丙烷，然后在恒温摇床里反应2‑3h，反应温度为30‑40℃，转速为150‑170rpm，反应结束后用蒸馏水清洗4‑5小时；④、将步骤①得到的纳米抗体2‑4mg与3‑5mL 0.25M pH＝7.0‑9.0的Na2CO3溶液，以及步骤③得到的处理的填料混合物，在滚筒摇床上25℃偶联6‑8h；⑤、偶联结束后，向该偶联得到的混合物中加入0.05‑0.1g Glycine甘氨酸，再在滚筒摇床上25℃反应6‑12h；⑥、反应结束后，将得到的混合物转移到一个空的层析柱中，弃掉滤液，用10‑20倍柱床体积的1M NaCl溶液清洗柱子，获得偶联了纳米抗体的亲和柱；⑦、然后将需要纯化的IgY样品2mL加入到步骤⑥得到的纳米抗体亲和柱中，在滚筒摇床上25℃偶联2‑4h，结束后用10‑20倍柱床体积PBS清洗柱子；⑧、然后用2‑4mL pH＝2.8‑3.5，浓度为0.2mol/L甘氨酸盐酸将IgY从柱子上洗脱下来，随即对洗脱下来的IgY用PH＝8.0的甘氨酸盐酸进行中和，避免IgY在酸性条件下失去活性，到此步骤已获得高纯度的IgY。