[发明专利]一种脐带间充质干细胞的扩增方法及其在关节炎上的应用

摘要

本发明涉及脐带间充质干细胞的分离培养技术的改良及其在关节炎上的应用，本发明提供一种脐带来源的间充质干细胞的分离培养方法及其在关节炎上的应用，包括如下步骤：1）采用酶消化法从人脐带中获得间充质干细胞；2）用添加碱性成纤维细胞生长因子及血小板衍生生长因子的DMEM/F12培养基联合富含血小板的血浆培养间充质干细胞；3）透明质酸的改良，在透明质酸中加入甲基丙烯酸酐，形成3D生物支架，可将间充质干细胞固定于骨关节损伤部位，进行定点修复；4）将培养的间充质干细胞，联合PRP、改良的透明质酸，一起注射至志愿者的骨关节处，治疗骨关节炎。

主权项

1.一种脐带来源的间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，包括如下步骤：采用酶消化法从脐带中获得间充质干细胞：在GMP实验室的百级超净工作台上，将脐带剪短，剥离出华通氏胶，按体积比例10:1，加入0.25%~0.5%胰蛋白酶及0.2~0.4% EDTA，37℃条件下消化一段时间后，再加入1~5mg/mL I型胶原蛋白酶消化；扩增间充质干细胞：在DMEM/F12培养基中加入细胞生长因子bFGF、PDGF及富含血小板的血浆，在35~37℃，二氧化碳浓度1~5%的培养箱中培养间充质干细胞，所述细胞生长因子的浓度为：bFGF浓度为5~100ng/mL，PDGF活力单位为100~500U/mL，所述富含血小板的血浆是指自体全血经离心后得到的血小板浓缩物，浓度为5~20%。