[发明专利]一种紫花三叉白及种子组织培养方法

摘要

本发明提供一种紫花三叉白及种子组织培养方法，属于白及组织培养领域。所提供的一种紫花三叉白及种子组织培养方法按留种、蒴果选择、蒴果处理、无菌播种、种子萌发及从生芽的诱导增殖、生根壮苗、炼苗、出瓶洗苗、消毒步骤进行组织培养育苗。本发明提高了紫花三叉白及种子组织培养种苗的球茎、叶片大小，叶片基部更加粗壮，提高了白及的种植成活率。

主权项

1.一种紫花三叉白及种子组织培养方法，其特征在于：按如下步骤进行：第一步，留种：选择生长健壮的植株，且在直径1Km内无其它种类紫花三叉白芨母株，在花期，自然授粉，蒴果开始转黄时，选择成熟饱满的蒴果采收；第二步，蒴果选择：选择成熟饱满、无病虫害、无机械损伤、无自然开裂的蒴果；第三步，蒴果处理：先把蒴果两端进行处理，用剪刀把果柄修短至1cm，末端黑色的包裹物轻轻除去，但要保证蒴果完整、不开裂；再用生活饮用水小流水清洗表面的灰尘约1小时，晾干表面的水份，用洁净纸进行包裹；处理后的蒴果用75%酒精浸泡30秒，再用无菌水清洗2～3遍，再用0.1%浓度的升汞浸泡30min，再用无菌水清洗4～5遍，后在酒精灯火焰上灼烧1S～2S，备用；第四步，无菌播种：在无菌条件下，用镊子夹住消毒处理过的蒴果果柄，用解剖刀切开蒴果顶端，将蒴果置于培养瓶内轻轻的抖动，均匀撒播一层种子于MS培养基表面，立即封住瓶口；第五步，种子萌发及从生芽的诱导增殖：播种的培养瓶置于温度为23℃～27℃的洁净环境中，在光照时长为8小时/天、光照强度为2000lux～3000lux条件下培养一周后，再在光照时长为10小时/天的条件下，继续培养35～45天形成原球茎及从生芽；第六步，生根壮苗：培养瓶在注入95～115ml专有培养基后进行高温杀菌；杀菌后选择芽体健康、无污染、长出两片小叶、芽高0.8～1.2cm的丛生芽放置在注有专有培养基的培养瓶中培养，进行生根壮苗；培养环境的光照强度为2000lux～3000lux，光照时长为10小时/天，培养120天～135天，温度为23℃～27℃；第七步，炼苗：种苗在温度15℃～35℃、光照2000lux～20000lux范围条件下锻炼15天～20天后，以种苗叶片、种球变深绿即可出瓶；第八步，出瓶洗苗：打开瓶口，用镊子将经过炼苗后的种苗轻轻夹出，用流动的水下进行清洗，洗净根部附着的培养基；第九步，消毒：将清洗好的种苗用广谱性杀菌剂稀释喷雾或浸泡 5s～10s；种苗处理后置于阴凉地方平摊存放并及时进行移植。