[发明专利]一种融合蛋白PTEN-L-p53及其应用

摘要

本申请属于肿瘤治疗相关技术领域，具体涉及一种融合蛋白PTEN‑L‑p53及其应用的专利申请。该蛋白制备时包括：对PTEN‑L前导序列和TP53分别进行PCR扩增、融合PCR制备PTEN‑L‑p53融合序列、酶切与连接、转化与筛选鉴定等步骤。本申请中，以具有自由进出细胞功能的PTEN‑L前导序列与具有抑制肿瘤功能的p53融合制备了融合蛋白。初步研究表明，所制备融合蛋白能够自由进出细胞，并且具备p53的肿瘤抑制功能和抑制侵袭功能，表现出较好的应用前景。本申请所提供的融合蛋白PTEN‑L‑p53作为一种人类内源性蛋白，可以较好避免免疫原性，提高相关治疗性蛋白的实用性。

主权项

1.一种融合蛋白PTEN‑L‑p53，其特征在于，该融合蛋白通过如下步骤制备获得：（1）序列扩增及融合对PTEN‑Long前导序列和TP53分别进行PCR扩增，所述PTEN‑L前导序列，包括519bp，碱基序列如SEQ ID NO.1所示；采用PCR扩增方式，对PTEN‑L前导序列进行扩增，PCR扩增时引物序列设计如下：正向引物：5'‑AAGCTTGCTGGAGCGGGGGGGAGAAGC‑3'，反向引物：5'‑TCCATTGATCCTCCTCCTCCGTCTGGGAGCCTGTGGCTGA‑3'；所述TP53序列，包括1179bp，碱基序列如SEQ ID NO.2所示；采用PCR扩增方式，对TP53序列进行扩增，PCR扩增时引物序列设计如下：正向引物：5'‑CAGACGGAGGAGGAGGATCAATGGAGGAGCCGCAGTCAGA‑3'，反向引物：5'‑CTCGAGAGTCTGAGTCAGGCCCTTCTG‑3'；（2）融合PCR制备PTEN‑L‑p53融合序列所述PTEN‑L‑p53融合基因序列，包括1713bp，碱基序列如SEQ ID NO.3所示；以步骤（1）中所回收的PTEN‑L 前导序列的PCR扩增产物和TP53的PCR扩增产物为模板，融合PCR扩增时，引物序列设计如下：正向引物：5'‑AAGCTTGCTGGAGCGGGGGGGAGAAGC‑3'，反向引物：5'‑CTCGAGAGTCTGAGTCAGGCCCTTCTG‑3'；（3）酶切与连接对pSecTag2 A载体进行酶切，并与步骤（2）中的PTEN‑L‑p53融合序列进行连接；（4）转化与筛选鉴定将步骤（3）中的连接产物转化大肠杆菌Top10感受态细胞，并筛选转化正确菌株，验证正确后，提取质粒获得pSecTag2 A‑PTEN‑L‑p53重组载体；将所获得的构建正确的重组载体进一步转化表达细胞后进行表达，即可获得融合蛋白PTEN‑L‑p53。