[发明专利]一种延长保存期的口蹄疫病毒cELISA抗体检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种通过保护固态口蹄疫病毒抗原而延长保存期的口蹄疫病毒cELISA抗体检测试剂盒，先制备抗原保护剂：配制0.01M的PBS缓冲液作母液，依次加入10％BSA、10％的海藻糖、3％枸杞多糖、3％芦荟多糖、0.01％硫柳汞、0.05％吐温‑20；充分混匀后经0.45nm孔径滤膜过滤除菌，经无菌检验合格后方可使用；向制备好的口蹄疫病毒抗原固定板中加入抗原保护剂，可将酶标板内口蹄疫抗原稳定性保存期在4‑6℃条件下延长至12个月，采用此酶标板制备的试剂盒比目前此类试剂盒的保存期长一倍，降低了养猪场购买试剂盒的成本，也减小了兽医工作的管理强度。

主权项

1.一种延长保存期的口蹄疫病毒cELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，通过如下步骤制备而成：1)制备抗原保护剂：配制0.01M的PBS缓冲液作母液，依次加入10％BSA、10％的海藻糖、3％枸杞多糖、3％芦荟多糖、0.01％硫柳汞、0.05％吐温‑20；充分混匀后经0.45nm孔径滤膜过滤除菌，经无菌检验合格后方可使用；2)制备口蹄疫病毒抗原固定板：将兔抗口蹄疫病毒抗体用pH9.6的包被液稀释，50μl/孔加入到96孔酶标板内，4℃静置16小时；倒掉包被液，用0.01M的PBST洗涤3遍；每孔加入口蹄疫病毒抗原悬液50μl，37℃反应1小时；倒掉液体，用0.01M PBST洗涤3遍，即为口蹄疫病毒抗原固定板；3)制备延长保存期的口蹄疫病毒cELISA抗体检测酶标板：向步骤2)所得口蹄疫病毒抗原固定板中加入步骤1)所得抗原保护剂，每孔加入50μL抗原保护剂，4℃平稳放置16小时，倒弃抗原保护剂，用吸水纸上轻轻拍干，放置于通风柜或其它风干设备室温风干1小时，即可获得延长保存期的口蹄疫病毒cELISA抗体检测酶标板；4)制备试剂盒后保存：用步骤3)所得检测酶标板5块，与相应的豚鼠抗口蹄疫病毒血清600μL、口蹄疫病毒阳性对照血清300μL、口蹄疫病毒阴性对照血清600μL、兔抗豚鼠HRP标记二抗50μL、稀释液60mL、TMB显色液30mL、终止液30mL、0.01M的PBS粉剂2袋和2mL的吐温‑20，共同组成延长保存期的口蹄疫病毒cELISA抗体检测试剂盒，置于4℃保存。