[发明专利]一种负载BMSCs的胶原-柞蚕丝素蛋白复合支架的制备方法

摘要

本发明涉及医疗制剂技术领域，具体涉及一种负载BMSCs的胶原‑柞蚕丝素蛋白复合支架的制备方法。该负载BMSCs的胶原‑柞蚕丝素蛋白复合支架的制备方法包括：步骤一、胶原蛋白溶液的制备；步骤二、柞蚕丝素蛋白溶液的制备；步骤三、BMSCs悬液的制备；步骤四、复合支架的制备。本发明所制得的负载BMSCs的胶原‑柞蚕丝素蛋白复合支架具有良好的生物相容性，无炎症反应、毒性反应、免疫排斥反应等，细胞黏附力强，可促进皮肤创面修复。同时该复合支架能保持创面的湿度，防止体液与水分的流失；可提供生物屏障，防止创面感染、细菌侵入；并且具备一定的柔韧性和拉伸性能，在组织愈合期间保持其功能和形态。

主权项

1.一种负载BMSCs的胶原‑柞蚕丝素蛋白复合支架的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：步骤一、胶原蛋白溶液的制备：对富含胶原蛋白的动物组织进行提取胶原蛋白，得到粗提取液，然后将粗提取液进行纯化处理，得到纯胶原蛋白溶液；步骤二、柞蚕丝素蛋白溶液的制备：将柞蚕丝进行脱胶处理，再将处理后的柞蚕丝放入溶解液中加热溶解，得到柞蚕丝素蛋白粗提取液，然后将柞蚕丝素蛋白粗提取液进行过滤、透析处理，制得柞蚕丝素蛋白溶液；步骤三、BMSCs悬液的制备：用DMEM培养基反复冲洗来源于动物的骨髓腔，得到骨髓组织冲洗液，随后将骨髓组织冲洗液进行离心，然后弃去上清液后在培养液中重悬细胞，接种，然后置于培养箱中进行原代培养，一定时间后进行首次全量换液，保留贴壁细胞，之后隔一定时间换液，当保留的贴壁细胞达到一定百分比融合时，用胰酶消化，并进行离心后按一定比例进行细胞传代培养，然后选取BMSCs，进行消化和离心后，用培养基重悬，得到BMSCs悬液；步骤四、复合支架的制备：将步骤一制得的纯胶原蛋白溶液与步骤二制得的柞蚕丝素蛋白溶液分别用水稀释至一定的浓度，然后按比例进行混合，将混合液冷冻干燥，制得胶原‑柞蚕丝素蛋白复合支架，然后将制得的胶原‑柞蚕丝素蛋白复合支架进行消毒，再将步骤三得到的BMSCs悬液在胶原‑柞蚕丝素蛋白复合支架中培养一定时间，即制得所述负载BMSCs的胶原‑柞蚕丝素蛋白复合支架。