[发明专利]一种丝状真菌基因敲除突变体的筛选方法在审
| 申请号： | 201810351803.X | 申请日： | 2018-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN108546708A | 公开（公告）日： | 2018-09-18 |
| 发明（设计）人： | 谢鑫;王勇;蒋君梅 | 申请（专利权）人： | 贵州大学 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/65 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 张行超 |
| 地址： | 550025 贵州*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种丝状真菌基因敲除突变体的筛选方法，包括以下步骤：(1)构建HPH‑GFP融合表达载体，并克隆出HPH‑GFP片段；(2)分别用带有接头序列的引物克隆待敲除基因的上、下游片段；(3)克隆待敲除基因上、下游片段与HPH‑GFP组成嵌合体片段；(4)用嵌合体片段转化真菌原生质体，得转化子备用；(5)将转化子置于含有潮霉素的培养基中进行培养，对正常生长出来的菌丝，用荧光显微镜观察并选择有GFP荧光的转化子，即为敲除突变体；本发明用以解决现有技术存在的基因敲除筛选成功率低，假阳性率高等技术问题。 | ||
| 搜索关键词： | 基因敲除 突变体 转化子 敲除 丝状真菌 下游片段 克隆 嵌合体 筛选 荧光显微镜观察 融合表达载体 真菌原生质体 菌丝 假阳性率 接头序列 培养基 基因 潮霉素 荧光 构建 引物 成功率 备用 生长 转化 | ||
【主权项】：
1.一种丝状真菌基因敲除突变体的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建HPH‑GFP融合表达载体，并克隆出HPH‑GFP片段；(2)分别用带有接头序列的引物克隆待敲除基因的上、下游片段；(3)克隆待敲除基因上、下游片段与HPH‑GFP组成嵌合体片段；(4)用嵌合体片段转化真菌原生质体，得转化子备用；(5)将转化子置于含有潮霉素的培养基中进行培养，对正常生长出来的菌丝，用荧光显微镜观察并选择有GFP荧光的转化子，即为敲除突变体。
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