[发明专利]表达抗体Fab片段的方法有效

专利信息
申请号: 201810355289.7 申请日: 2018-04-19
公开(公告)号: CN110387394B 公开(公告)日: 2022-01-11
发明(设计)人: 冯军;黄宗庆;李乐乐;吴勇;路建光;张庆彬;张友 申请(专利权)人: 上海多米瑞生物技术有限公司;上海医药工业研究院
主分类号: C12P21/00 分类号: C12P21/00;C12R1/19
代理公司: 上海一平知识产权代理有限公司 31266 代理人: 胡丹;徐迅
地址: 201203 上海市浦东新区中国(*** 国省代码: 上海;31
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摘要: 发明公开了一种表达抗体Fab片段的方法。具体方法是将保存的重组基因工程大肠杆菌种子,经过活化,摇瓶培养,扩大转接至5L发酵罐中通气搅拌培养,当发酵罐中菌体OD600达到约40时,补加一定量的MgSO4,并降温至25℃,继续发酵,当菌体OD达到约90时,加入IPTG进行诱导,并流加补料培养基进行补料,发酵进行到70‑90小时后,收集发酵液。本发明通过优化发酵过程中的溶氧DO,诱导剂IPTG终浓度C,补料速度V,加入IPTG后继续发酵的温度T等可以大大提高抗VEGF抗体Fab片段的表达量,最高的表达量可以达到360mg/L,可大大降低抗VEGF抗体Fab片段的生产成本。
搜索关键词: 表达 抗体 fab 片段 方法
【主权项】:
1.一种大肠杆菌周质中表达蛋白的方法,其特征在于,包括步骤:(1)提供一表达目的蛋白的大肠杆菌菌种;(2)发酵步骤,利用发酵培养基对(1)中的大肠杆菌菌种进行发酵;(3)诱导表达步骤,流加补料培养基和加入IPTG并继续发酵,进行目的蛋白的诱导表达;所述继续发酵的温度为T、溶氧为DO,IPTG终浓度为C;其中,流加补料培养基的速度V为6mL/h‑20mL/h,较佳地为6mL/h‑12mL/h,更佳地为7mL/h‑10mL/h。
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