[发明专利]一种同时检测猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病毒的试剂盒及应用有效

专利信息
申请号: 201810357649.7 申请日: 2018-04-20
公开(公告)号: CN108504778B 公开(公告)日: 2019-06-11
发明(设计)人: 黄超华;花群义;曹琛福;杨俊兴;阮周曦;林彦星;曾少灵;王潇 申请(专利权)人: 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心
主分类号: C12Q1/70 分类号: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
代理公司: 北京汇知杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11587 代理人: 蔡伦;杨巍
地址: 518000 广东*** 国省代码: 广东;44
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摘要: 发明公开了一种可同时快速检测猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病毒的实时荧光RPA引物和探针、包括所述引物和探针的试剂盒及其用途。本发明公开了一种可同时快速检测猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病毒的方法所述方法使用所述实时荧光RPA引物和探针和试剂盒。本发明的方法的敏感性为102拷贝/反应,即每个反应可同时最低检测出102拷贝的猪圆环病毒2型和102拷贝的猪伪狂犬病毒。本发明的方法能快捷、高效、灵敏的同时检测猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病毒,为两者的混合感染的快速检测提供了有效的技术手段。
搜索关键词: 猪圆环病毒2型 猪伪狂犬病毒 快速检测 试剂盒 拷贝 探针 引物 实时荧光 检测 方法使用 混合感染 技术手段 灵敏 应用
【主权项】:
1.引物和探针在制备用于同时检测猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病毒的制剂中的用途,所述引物和探针包括:序列如SEQ ID NO.1所示的第一引物,序列如SEQ ID NO.2所示的第二引物,序列如SEQ ID NO.3所示的第一探针,其中,所述第一引物和所述第二引物组成引物对;序列如SEQ ID NO.4所示的第三引物,序列如SEQ ID NO.5所示的第四引物,序列如SEQ ID NO.6所示的第二探针,其中,所述第三引物和所述第四引物组成引物对;所述第一探针的修饰如下:(1)第31位碱基修饰BHQ1‑dT;(2)第35位碱基修饰6‑FAM‑dT;(3)第33位碱基替换为dSpacer;(4)3'端修饰C3 Spacer;所述第二探针修饰如下:(1)第27位碱基修饰BHQ1‑dT;(2)第30位碱基修饰6‑HEX‑dT;(3)第28位碱基替换为dSpacer;(4)3'端修饰C3 Spacer;检测的步骤包括:(1)提取待测样本的DNA;(2)以所述DNA为模板,使用所述引物和探针进行双重实时荧光RPA检测:反应过程中实时检测FAM和HEX的荧光信号;对扩增结果进行分析,以扩增起始2.5‑3.5min内的荧光信号强度的平均值加上3‑4倍的标准方差(SD)作为检测阈值,结果判断如下:(a)若在RPA扩增的15min内,FAM荧光信号值超过阈值且出现拐点,而HEX荧光信号未超过阈值或未出现拐点,则表明扩增结果为猪圆环病毒2型阳性,猪伪狂犬病毒阴性;(b)若在RPA扩增的15min内,HEX荧光信号值超过阈值且出现拐点,而FAM荧光信号值未超过阈值或未出现拐点,则表明扩增结果为猪伪狂犬病毒阳性,猪圆环病毒2型阴性;(c)若在RPA扩增的15min内,FAM和HEX荧光信号值均超过阈值且出现拐点,则表明扩增结果为猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病毒双阳性;(d)若在RPA扩增的15min内,FAM和HEX荧光信号值均未超过阈值或未出现拐点,则表明扩增结果为猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病毒双阴性。
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