[发明专利]一种玉米遗传转化方法

摘要

本发明属于植物遗传转化技术领域，特别提供了一种玉米遗传转化方法，包括如下步骤：制备转化受体、制备侵染液、侵染、共培养、恢复培养、筛选、分化培养，得到玉米的带有潮霉素抗性基因或Bar抗性基因的玉米遗传转化植株。本方法过程简单、操作方便、参数及培养基优化，能够在较短时间内获得高遗传转化率的玉米转基因植株。

主权项

1.一种玉米遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：1)制备转化受体灭菌：授粉7‑13d的玉米棒子用70％的乙醇灭菌10min；去胚乳：使用无菌水清洗幼胚2‑5次，洗掉胚乳，获得幼胚的长度在2‑4mm；2)制备侵染液取50ml Zm‑inf，依次加入Cys 130μl、HCl 130μl、AS 100μl、Vc 25μl，将农杆菌挑至混合液中，制成侵染液；3)侵染将调好的侵染液加至放有玉米幼胚的瓶中，放置摇床100rpm侵染20min，之后取出置于无菌滤纸上吹20min；4)共培养将步骤3)吹至表面无液体的幼胚，接至放置有一张灭菌滤纸Zm‑cocu共培养基上，幼胚盾片朝上，暗处培养3天，除去幼胚上长出的芽，保留淡黄色的幼胚；5)恢复培养将共培养后的幼胚取出放置于灭菌皿中，观察幼胚是否膨胀大，边缘是否有愈伤，之后将幼胚放入zm‑reco培养基中恢复7d；6)筛选第一次筛选：选择出无污染、淡黄色的幼胚接入到第一次筛选培养基中筛选7d；第二次筛选：第一次筛选后，将幼胚转入到第二次筛选培养基中筛选14d，筛选3‑5次，直到筛选到胚性愈伤；7)分化培养将获得的胚性愈伤接入分化培养基Zm3中光培养，每12～15d循环继代一次，直到玉米新芽长出到3‑4cm；各步骤中用到的培养基具体配方见下表：上述培养基配方表中的各个代码代表含义为：