[发明专利]一种盖髓材料体外评估模型的制备方法

摘要

本专利申请涉及牙科制剂技术领域，具体涉及盖髓材料体外评估技术领域。本发明公开了一种盖髓材料体外评估模型的制备方法，其特征在于包括以下步骤：S1.获取离体牙；S2.分离牙髓细胞；S3.扩增细胞；S4.加ECM成球生长；S5.连续诱导，制备人牙本质提取物，将含牙本质提取物的培养基加入到培养板中连续诱导细胞，制成人牙髓类器官模型。本发明选取人体离体牙牙髓细胞，经过细胞分离、扩增，并采用创形式的细胞成球生长方法，最后采用连续诱导的方式，细胞的生长效率高，并高度模拟了人体牙髓器官，提升了整个材料体外评估的效率和准确性。

主权项

1.一种盖髓材料体外评估模型的制备方法，其特征在于包括以下步骤：S1.获取离体牙：取口腔门诊上新鲜拔除的健康完整、无牙体牙周疾病的阻生磨牙或因正畸拔除的前磨牙，即刻放入预冷的含青链霉素的无血清DMEM/F12培养基中进行原代培养，随后进行分离培养；S2.分离牙髓细胞：清洗并将牙齿截断，暴露牙髓，取出牙髓用含青链霉素的PBS冲洗，将牙髓组织剪碎,随后进行离心操作,去除上清，并吸去多余的PBS冲洗液；S3.扩增细胞：将步骤S2中的牙髓组织加入I型胶原酶溶液，加入含有FBS的DMEM/F12培养基终止消化，随后离心操作，去除上清；将组织块转移培养箱中培养，用胰酶消化收集细胞；将细胞用冻存液重悬后转移至冻存管，放入程序化冻存盒，冷却，后转移至液氮罐长期保存；S4.加ECM成球生长：制备人牙髓特异性ECM，将步骤S3所获取牙髓细胞接种于培养板中，加入含有人牙髓特异性ECM的培养基进行培养；S5.连续诱导：制备人牙本质提取物，将含牙本质提取物的培养基加入到培养板中连续诱导细胞，制成人牙髓类器官模型。