[发明专利]一种免栽培快速获取花魔芋组织块的发酵生产方法

摘要

本发明属于植物组织发酵培养技术领域，具体涉及一种免栽培快速获取花魔芋组织块的发酵生产方法。本发明通过获取能够快速形成愈伤组织的外植体，经过无菌处理后，将外植体进行愈伤组织诱导培养，愈伤组织转入愈伤组织增殖培养基，获取大量的愈伤组织。将扩繁的愈伤组织转入愈伤组织液体增殖发酵培养基，进行花魔芋愈伤组织块发酵培养，获取大量的花魔芋组织块。本发明所使用的外植体污染率低，愈伤组织形成速度快，不用进行魔芋种苗生产和田间耕种管理，产量不受季节气候条件影响，获取的花魔芋组织块营养价值与田间栽培所收获魔芋块茎一致。能够快速获得大量花魔芋组织块，大大缩短了生产周期，有利于规模化大批量生产。

主权项

1.一种免栽培快速获取花魔芋组织块的发酵生产方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一 采集外植体类型为球茎上新发的小块茎，将小块茎放入无菌蒸馏水中浸泡30 min后，用75%的乙醇消毒30 s，再用3%过氧化氢消毒20 min，然后用无菌蒸馏水冲洗5遍去除小块茎表面的过氧化氢；步骤二 在无菌条件下将小块茎用解剖刀去皮并切成长约0.5 cm×0.5 cm的小块，接入愈伤组织诱导培养基，置于24~26 ℃、湿度65~75%的培养箱中暗培养12~18天；愈伤组织诱导培养基为：MS+6‑BA 0.50 mg/L+NAA 0.10 mg/L+5 g/L葡萄糖+15 g/L蔗糖+7.8 g/L琼脂粉，灭菌前pH调至5.8~6.0；步骤三 将愈伤组织转入愈伤组织增殖培养基上，每皿接种3~5个切成直径为0.2~0.5 cm的愈伤组织小块，置于24~26 ℃、湿度65~75%的培养箱中暗培养；10天后，愈伤组织长至1~1.5 cm的淡黄色球状体；愈伤组织增殖培养基为：MS+0.5 mg/L NAA+0.1 mg/L 6‑BA+5 g/L 葡萄糖+15 g/L蔗糖+7.8 g/L琼脂粉，灭菌前pH调至5.8~6.0；步骤四 将扩繁的愈伤组织块切成直径为0.2~0.4 cm的愈伤组织小块，转入液体培养基进行发酵培养，发酵培养条件设置为22~26 ℃，O2浓度为8~9 mg/L，pH为5.8~6.0；液体培养基为：NH4NO3 650 mg/L，KNO3 900 mg/L，CaCl2·2H2O 440 mg/L，MgSO4·7H2O 370 mg/L，KH2PO4 700 mg/L，KI 0.83 mg/L，H3BO3 6.2mg/L，MnSO4·4H2O 22.3 mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L，Na2MnO4·2H2O 0.25 mg/L，CuSO4·5H2O 0.025 mg/L，CoCl2·6H2O 0.025 mg/L，FeSO4·7H2O（27.8 mg/L）+Na2‑EDTA·2H2O（37.3 mg/L），肌醇100 mg/L，烟酸0.5 mg/L，盐酸吡哆醇（维生素B6）0.5 mg/L，盐酸硫胺素（维生素B1）0.5 mg/L，甘氨酸2 mg/L，15 g/L蔗糖；培养45~60天，期间根据花魔芋组织块生长情况更换发酵液一次；所述魔芋组织块发酵液在115 ℃、67 Kpa下灭菌15 min。