[发明专利]一种以新城疫病毒热稳定毒株制备的灭活疫苗及其制备方法

摘要

本发明公开了一种以新城疫病毒热稳定毒株制备的灭活疫苗及其制备方法。该疫苗以新城疫病毒热稳定毒株为疫苗毒种，其制备方法包括新城疫病毒热稳定毒株病毒尿囊液的制备、优化的稀释缓冲液对病毒尿囊液进行稀释、β‑丙内酯灭活病毒及油乳剂灭活疫苗的制备与检验。该疫苗的热稳定性显著高于其他常规灭活疫苗，同时仍具有良好的免疫原性，克服了目前常用新城疫疫苗热稳定相对较差、冷链系统依赖程度高等问题，具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种灭活疫苗的制备方法，制备该灭活疫苗所使用的毒株为新城疫病毒热稳定毒株，所述新城疫病毒热稳定毒株为TS09‑C株，其特征在于，包括以下步骤：（1）病毒尿囊液的制备将新城疫病毒热稳定毒株接种9‑11日龄SPF鸡胚，孵育，收获尿囊液于无菌容器中；（2）病毒尿囊的稀释测定尿囊液中的病毒含量，以病毒稀释缓冲液进行稀释，将病毒含量稀释至10^8.0 EID₅₀/ml，所述病毒稀释缓冲液由100mmol/L Tris‑HCl、5mmol/L氯化钠、5mmol/L氯化钾、1.0mmol/L氯化镁、2.0mmol/L氯化钙和1.0mmol/L磷酸氢二钠组成；（3）β‑丙内酯灭活病毒尿囊液将稀释后的病毒尿囊液以病毒灭活剂进行灭活处理，期间振摇多次，所述灭活剂的使用浓度为占稀释后的病毒尿囊液体积的0.025%；（4）油乳灭活疫苗的制备将白油、硬脂酸铝和司本‑80混匀制成油相，加入步骤（ 3）得到的病毒液乳化，病毒液与油相体积比为2:1‑4:1，即得到新城疫病毒热稳定毒株的灭活疫苗。