[发明专利]一种转移因子胶囊的总氨基酸定量检测方法

摘要

本发明公开的一种检测转移因子胶囊中总氨基酸含量的方法，解决了现有技术中仅检测游离氨基酸，并不能检测到组成多肽类物质的键合氨基酸，及在氨基酸检测过程中由于转移因子为多组分生化药而使得各氨基酸峰与未知组分峰分离度差的技术难题，同时采用“一测多评”的方法通过一个谷氨酸对照品实现18种常见氨基酸的定量检测，解决了外标法需要对照品较多，检测成本较高，操作繁琐的技术难题。本发明以谷氨酸为内参物，经过系统的验证研究，确定其他17种氨基酸的相对校正因子及相对保留时间；实现18种氨基酸的定量检测。该检测方法准确可靠、分离效果好、专属性强，能有效地对转移因子胶囊中的总氨基酸进行检测与监控。

主权项

1.一种转移因子胶囊的总氨基酸定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)制备总氨基酸测定衍生用供试品溶液精密称取转移因子胶囊内容物0.9～1.2g，加入0.1mol/L盐酸溶液使转移因子被充分溶解，摇匀，静置，取上清液用微孔滤膜过滤，然后精密量取续滤液2.0mL，置于反应容器中，加入浓盐酸溶液6mL，充氮封口，于110℃条件下水解24h后，冷却，制得转移因子酸水解液，将转移因子酸水解液启封、水浴蒸发至干，加入0.1mol/L盐酸溶液10mL溶解残留物，制得总氨基酸测定衍生用供试品溶液；2)制备总氨基酸含量测定供试品溶液精密量取总氨基酸测定衍生用供试品溶液4.0mL、0.1mol/L异硫氰酸苯酯乙腈溶液2.0mL和1mol/L三乙胺乙腈溶液1.0mL，混合后摇匀，室温下反应1h后，用8.0mL正己烷萃取，静置10min，取下层溶液用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得总氨基酸含量测定供试品溶液；3)测定标准曲线以谷氨酸为对照品，配制标准曲线系列溶液，并通过高效液相色谱法，得到色谱图，以谷氨酸浓度对其峰面积按最小二乘法进行线性回归，求得标准曲线方程及线性相关系数；4)精密量取步骤2)制得的总氨基酸含量测定供试品溶液2μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，得到总氨基酸含量测定供试品溶液中以谷氨酸为内参物，以相对保留时间定位的18种氨基酸色谱峰，将各色谱峰的面积代入标准曲线方程中求出各氨基酸含量，并乘以各氨基酸相对于谷氨酸的相对校正因子，再求和计算出转移因子胶囊中总氨基酸含量。