[发明专利]一种利用红掌叶脉诱导分化不定芽的组培方法

摘要

本发明公开了一种利用红掌叶脉诱导分化不定芽的组培方法，步骤是：（1）母本材料选取；（2）外植体处理：以母本幼嫩叶片的叶脉作组培外植体，将叶片从母本剪下后，用自来水冲洗；依次使用酒精浸泡，灭菌水冲洗，双氧水浸泡，灭菌水冲洗；将叶脉沿其边缘剪切；（3）启动培养：将切割好的叶脉水平接入启动培养基，放入培养室培养；（4）愈伤组织分化培养：启动培养结束，叶脉边缘形成愈伤组织，转接入愈伤组织分化培养基；（5）不定芽诱导培养：愈伤组织分化培养结束，愈伤组织增大，转接入培养基进行不定芽诱导培养，愈伤组织上诱导分化出不定芽。本方法易行，操作简便，降低了外植体褐化率，提高了愈伤组织诱导率，改善了红掌组培技术。

主权项

1.一种利用红掌叶脉诱导分化不定芽的组培方法，其步骤为：/n（1）母本材料选取：选取红掌植株作为母本材料；/n（2）外植体处理：以母本幼嫩叶片的叶脉作组培外植体，将叶片从母本剪下后，用自来水冲洗20~30 min；之后在超净工作台上依次使用体积比为70~75 %的酒精浸泡30~60 s，灭菌水冲洗2~3遍，体积比为10~12 %的双氧水溶液浸泡10~20 min，灭菌水冲洗3~5遍，将叶脉沿其边缘剪切，并切割成1 cm长待用；/n（3）启动培养：将切割的叶脉水平接入1号培养基，放入培养室培养；/n（4）愈伤组织分化培养：启动培养30~60 d后，叶脉边缘形成愈伤组织，转接入2号培养基；/n（5）不定芽诱导培养：愈伤组织分化培养30~60 d后，愈伤组织增大，表面出现点状突起，转接入3号培养基，不定芽诱导培养30~60 d后，愈伤组织上诱导分化出1~2 cm高不定芽；/n所述的1号培养基为1/2 MS+TDZ 0.01~0.05 mg/L +6-BA 0.5~2.0 mg/L+NAA 0.1~1.0mg/L；/n所述的2号培养基为1/2 MS+6-BA 0.5~2.0 mg/L+NAA 0.1~1.0 mg/L+ 2,4-D 0.01~0.5 mg/L；/n所述的3号培养基为MS +6-BA 0.2~1.5 mg/L+NAA 0.01~0.8 mg/L；/n所述的1号、2号、3号培养基pH为5.8~6.0；/n所述的启动培养阶段和愈伤组织分化培养阶段，培养室的培养条件为：温度23－27℃，黑暗培养；/n所述的不定芽诱导培养阶段，培养室的培养条件为温度23－27 ℃、光照强度1500~2000 lx、光照周期12~14 h/d。/n