[发明专利]一种有效的活性污泥胞外蛋白质的提取分离方法及应用

摘要

本发明属于环境工程领域，涉及活性污泥的处理方法，特别是指一种有效的活性污泥胞外蛋白质的提取分离方法及应用。本发明以阳离子交换树脂中的钠离子置换微生物细胞与EPS之间键桥接的多价态阳离子，削弱EPS与微生物间引力，最后通过离心将EPS与污泥主体分离。其次通过酸沉淀蛋白析出法，沉淀出EPS溶液中大多数蛋白质，将其分离纯化后即可进行电泳分析。提取胞外蛋白，通过胞外蛋白的表达形式判断污泥性质，用于揭示污泥特性、衰减及沉降性能的差异。

主权项

1.一种有效的活性污泥胞外蛋白质的提取分离方法，其特征在于，步骤为：（1）活性污泥中EPS的提取a. 量取30‑40ml MLSS约5000的泥水混合液置于50mL 的离心管，6000‑8000 r/min离心15‑30 min，弃去上清液，补充磷酸缓冲液至原液位，混合均匀后得污泥样品；b. 将得到的污泥样品混入阳离子交换树脂得污泥样品混合液，污泥样品混合液移至混凝土搅拌器，搅拌后取上清进行离心，离心后再取上清经0.45‑0.55 μm玻璃纤维滤膜过滤后，得到蛋白质/DNA比值最低的活性污泥EPS溶液；（2）活性污泥EPS溶液中蛋白质的提取a. 取活性污泥EPS溶液装入20ka渗析袋，将渗析袋浸泡于丙二醇溶中4‑5 ℃下过夜浓缩至1‑1.5 mL，将浓缩液转移至离心管内，离心后取上清液转移至新的离心管中，获得胞外EPS浓缩液；b. 将EPS浓缩液低温下加入100%三氯乙酸溶液，使得最终浓度为10‑15%，4‑6 ℃静置2‑4 h，10000‑13000 g离心10‑15 min后，弃去上清液，并以冰乙醇洗去残留的三氯乙酸，10000‑13000 g离心10‑15min后弃去上清液，并重复此步骤2次，置于冷冻干燥机中冻干残余乙醇，加入20µL SDS‑PAGE Loading Buffer，涡旋振荡器重悬菌液后，95‑100℃水浴10‑20 min，使蛋白质变性，将其搁于‑20℃冰箱内保存，即得活性污泥中蛋白质的混合液；（3）活性污泥胞外蛋白质的分离活性污泥中蛋白质的混合液通过SDS‑PAGE凝胶电泳分离即完成活性污泥胞外蛋白质的提取分离。