[发明专利]一对同时快速检测无乳链球菌和海豚链球菌的引物及其应用有效
| 申请号： | 201810386682.2 | 申请日： | 2018-04-26 |
| 公开（公告）号： | CN108342499B | 公开（公告）日： | 2019-04-05 |
| 发明（设计）人： | 崔淼;张辉杰;张其中;许德麟 | 申请（专利权）人： | 暨南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/14;C12N15/11;C12R1/46 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 崔红丽;陈燕娴 |
| 地址： | 510632 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开一对同时快速检测无乳链球菌和海豚链球菌的引物及其应用。利用本发明的引物对样品进行检测，可实现一次性同时特异性检测样本中的无乳链球菌和海豚链球菌。本发明建立的分子检测方法对无乳链球菌和海豚链球菌的检测下限均为1.5pg/μL和5.8CFU/μL；在人工分别感染无乳链球菌和海豚链球菌的混合罗非鱼组织样中，其对两种菌的灵敏度均为105CFU/g；在腹腔注射无乳链球菌和海豚链球菌的罗非鱼脑、肝脏、脾脏和肾脏等组织器官中都能检出。本方法可同时快速检测罗非鱼养殖中无乳链球菌和海豚链球菌，对检测对象损伤小、快速准确、操作简便，可实现罗非鱼链球菌病的早期分子预警。 | ||
| 搜索关键词： | 海豚链球菌 无乳链球菌 快速检测 罗非鱼 引物 罗非鱼养殖 特异性检测 分子检测 分子预警 腹腔注射 检测对象 链球菌病 组织器官 灵敏度 一次性 组织样 检测 脾脏 检出 肾脏 肝脏 样本 应用 损伤 感染 | ||
【主权项】：
1.一种同时快速特异检测无乳链球菌和海豚链球菌的方法，其特征在于包括如下步骤：所述方法为非疾病诊断方法；(1)取待检样品；(2)加入引物ST‑1和ST‑2的反应混合液和待检样品，配成PCR反应体系混合液；进行PCR反应于一个反应程序：95℃预变性5min，94℃30sec，60℃30sec和72℃1min的30个循环，最后72℃延伸10min；(3)采用琼脂糖凝胶电泳检测检测液是否出现特异的DNA条带，出现则判定为阳性；没有出现特异性条带的则判定为阴性；阳性表示待检样品中含有无乳链球菌或/和海豚链球菌；阴性表示不含有无乳链球菌和海豚链球菌；其中，出现616bp片段的为无乳链球菌，794bp片段的则为海豚链球菌；引物序列为：ST‑1：5'‑TGAGGTAACCTTTTAGGAGC‑3'；ST‑2：5'‑AATCGCTTTTGCTTTCTC‑3'。
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