[发明专利]一种制备大肠埃希菌菌影并装载DNA质粒的方法在审
| 申请号： | 201810404756.0 | 申请日： | 2018-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN108587961A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 曾铁兵;江银波;凌晖;曹龙古;曹二龙;符波;唐一之 | 申请（专利权）人： | 南华大学 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 罗满 |
| 地址： | 421001 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本申请公开了一种制备大肠埃希菌菌影并装载DNA质粒的方法，包括以下步骤：a、大肠埃希菌悬液中加入CaCO3，SDS，NaOH，28‑40℃孵育，离心，收集沉淀，洗涤后收集沉淀；b、向步骤a洗涤后收集的沉淀中加入H2O2及缓冲液，28‑40℃孵育，离心，收集沉淀，洗涤，收集沉淀；c、向步骤b收集的沉淀中加入乙醇，静置反应，离心，收集沉淀，洗涤，加入缓冲液制得菌影重悬液；d、将菌影重悬液、质粒、CaCl2混合，1‑10℃孵育，然后30‑50℃热激活处理后，冰浴反应，离心，收集沉淀，即得装载有质粒的菌影。本发明提供的使用化学渗透压法制备菌影，结合氯化钙法装载DNA质粒的方法，具有成本低、操作简单、裂解和装载效率高，批次间稳定，可量产的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 沉淀 菌影 装载 洗涤 大肠埃希菌 孵育 缓冲液 重悬液 质粒 制备 静置反应 氯化钙法 热激活 渗透压 乙醇 冰浴 量产 裂解 悬液 申请 | ||
【主权项】：
1.一种制备大肠埃希菌菌影并装载DNA质粒的方法，其特征在于，包括以下步骤：a、大肠埃希菌悬液中加入CaCO3，SDS，NaOH，28‑40℃孵育，离心，收集沉淀，洗涤后收集沉淀；b、向步骤a洗涤后收集的沉淀中加入H2O2及缓冲液，28‑40℃孵育，离心，收集沉淀，洗涤，收集沉淀；c、向步骤b收集的沉淀中加入乙醇，静置反应，离心，收集沉淀，洗涤，加入缓冲液制得菌影重悬液；d、将菌影重悬液、质粒、CaCl2混合，1‑10℃孵育，然后30‑50℃热激活处理后，冰浴反应，离心，收集沉淀，即得装载有质粒的菌影。
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