[发明专利]用于检测和鉴定生物样品中的核酸序列的组合物和方法

摘要

本发明涉及用于检测和鉴定生物样品中的核酸序列的组合物和方法。本发明涉及用于分离、检测、扩增和定量生物样品中病原体特异性核酸的组合物和方法。本发明还提供含有特异性扩增引物和与从其获得的扩增产物特异性结合的标记的检测探针的诊断试剂盒。还公开了用于从种类广泛的样品(包括生物、环境、临床和/或兽医来源的样品)分离对于一种或多种病原体(包括，例如流感病毒和结核分枝杆菌)特异性的核酸和表征其的组合物和方法。

主权项

1.用于检测生物样品中的结核分枝杆菌复合群的成员的PCR即用组合物，其包含组分：以0.1 mM至1 mM的浓度共同存在于所述组合物中的包含基本上等量的dATP、dCTP、dGTP 和dTTP的脱氧核苷酸三磷酸的混合物；以0.01 mM至1 mM的浓度存在于所述组合物中的选自乙二醇四乙酸、羟乙基乙二胺三乙酸、二亚乙基三胺五乙酸、N,N‑双(羧基甲基)甘氨酸、乙二胺四乙酸、无水柠檬酸盐、柠檬酸钠、柠檬酸钙、柠檬酸铵、柠檬酸氢铵、柠檬酸、柠檬酸二铵、柠檬酸钾、柠檬酸镁、柠檬酸铁铵、柠檬酸锂、和它们的任何组合的螯合剂；以1 mM至1 M的浓度存在于所述组合物中的PCR摩尔渗透压浓度试剂N,N,N‑三甲基甘氨酸(甜菜碱)；选自牛血清白蛋白、人血清白蛋白、山羊血清白蛋白、哺乳动物白蛋白、和它们的任何组合的白蛋白；以50 mM至1 M的浓度共同存在于所述组合物中的至少两种盐，第一种是选自氯化钾和谷氨酸钾的钾盐，且第二种是选自氯化镁和硫酸镁的镁盐；和以1 mM至1 M的浓度存在于所述组合物中的选自三(羟基甲基)氨基甲烷(Tris)、柠檬酸盐、2‑(N‑吗啉代)乙磺酸(MES)、N,N‑双(2‑羟基乙基)‑2‑氨基乙磺酸(BES)、1,3‑双(三(羟基甲基)甲基氨基)丙烷(Bis‑Tris)、4‑(2‑羟基乙基)‑1‑哌嗪乙磺酸(HEPES)、3‑(N‑吗啉代)丙磺酸(MOPS)、N,N‑双(2‑羟基乙基)甘氨酸(Bicine)、N‑[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)、N‑2‑乙酰胺基‑2‑亚氨基二乙酸(ADA)、N‑(2‑乙酰胺基)‑2‑氨基乙磺酸(ACES)、哌嗪‑1,4‑双(2‑乙磺酸)(PIPES)、碳酸氢盐、磷酸盐和它们的任何组合的缓冲剂，pH为6.5至9.0，其中所述缓冲剂的pKa 在环境温度下的所述组合物的pH 的一个单位之内，其中所述组分与不含核酸酶的水相组合；且其中所述组合物包含一种或多种染料；以0.05U至1 U的量存在的热稳定聚合酶；与对结核分枝杆菌复合群的成员特异性的PCR扩增的核酸序列结合的标记的检测探针，其中所述标记的检测探针是20个至35个核苷酸长度的分枝杆菌特异性序列，并且包含SEQ ID NO 4或SEQ ID NO 7的序列；以及配置成通过PCR扩增对结核分枝杆菌复合群的成员特异性的核酸序列的PCR引物对，所述PCR引物对以0.5 µM至50 µM的浓度共同存在于组合物中，其中各PCR引物为18个至35个核苷酸长度。