[发明专利]一种赤眼蜂科8种赤眼蜂的早期分子检测及鉴定方法及应用

摘要

本发明提供一种赤眼蜂科8种赤眼蜂的早期分子检测及鉴定方法，通过分子生物学方法获取赤眼蜂的COI基因(mtDNA的细胞色素氧化酶I)，以PCR技术为基础，设计赤眼蜂COI基因特异性引物对待检测的寄主卵内赤眼蜂的COI基因进行扩增，将扩增出赤眼蜂COI基因片段的PCR产物作为模板，分别利用特异性内切酶SspI、VspI进行酶切，根据酶切产物电泳条带的不同，与8种赤眼蜂的标准带谱进行对比，实现对待检测的寄主卵中寄生的赤眼蜂种类的鉴定；并提供在生物防治农业害虫研究中的应用。本发明提供的检测和鉴定方法对仪器设备要求低，缩短了鉴定时间，并克服了无法利用形态对非成虫期赤眼蜂进行鉴定的不足，准确、快速、节约成本。

主权项

1.一种赤眼蜂科8种赤眼蜂的早期分子检测及鉴定方法，其特征在于，所述方法具体包括如下步骤：S1：提取待检测的寄主卵内赤眼蜂DNA；S2：以S1所得DNA为模板，对赤眼蜂COI基因进行PCR扩增，得到赤眼蜂COI基因片段的PCR扩增产物，所述赤眼蜂COI基因特异性引物为：正向引物TD‑6‑F：5’TTTATCTCATAGRGGWCCAAGAGT3’(SEQ ID No.1)；反向引物TD‑3‑R：5’AGAATCAGGATAATCAGATATTCG3’(SEQ ID No.2)；S3：以S2获得的赤眼蜂COI基因片段的PCR扩增产物为模板，分为两组，分别采用限制性内切酶SspI、VspI进行酶切，获得SspI酶切产物和VspI酶切产物；S4：将S3所得的SspI酶切产物和VspI酶切产物分别进行琼脂糖凝胶电泳，检测酶切结果，估算待检测样品各电泳条带大小，将电泳图中的电泳条带数量及条带大小的估算值与下表所示8种赤眼蜂的酶切标准带谱进行对比，查找到电泳条带数量及大小均分别与相应酶切标准带谱匹配的，该标准带谱所代表的种类即为待检测样品的种类：