[发明专利]一种培养斜生栅藻藻种生产天然类胡萝卜素的方法

摘要

本发明提供了一种培养斜生栅藻新驯化藻种Scenedesmus obliquus New生产天然类胡萝卜素的方法，通过黄浆水预处理、调pH、添加富硒培养物(来自"世界硒都"恩施)、灭菌、两侧红光灯管侧向给光培养，通过茉莉酸甲酯和顶部给光的蓝光7600lux、21h：3h光暗周期、32‑37℃温度刺激、氮饥饿、葡萄糖和木糖诱导类胡萝卜素，再经过藻体细胞低温高压均质破壁或超声波辅助提取类胡萝卜素制备富硒类胡萝卜素干品。本发明每克藻体干重可得新型富硒天然类胡萝卜素Scenecarotenoid干品123.12mg，本方法对生产硒天然类胡萝卜素新产品有显著帮助，极具开发前景和市场价值。

主权项

1.一种培养斜生栅藻藻种生产天然类胡萝卜素的方法，其特征在于包括以下步骤：S1、黄浆水预处理：将豆制品制作过程中的黄浆水收集后，使用5‑7层纱布过滤，过滤后调整黄浆水滤液的 pH 值至 7.5‑8.0 ；S2、制取富硒黄浆水培养基：在S1制得的黄浆水滤液中添加质量体积比为8%‑12% 的富硒马铃薯汁和质量体积比为25%‑35%的浓缩富硒泉水，黄浆水滤液、富硒马铃薯汁和浓缩富硒泉水的质量比为7:2:1，然后采用 121℃、30min高压蒸汽灭菌法灭菌，制得富硒黄浆水培养基；S3、活化斜生栅藻藻种：用S2中获得的富硒黄浆水培养基培养活化斜生栅藻藻种；S4、藻种初步培养：在富硒黄浆水培养基中接种S3中活化后的斜生栅藻藻种,初始接种密度是0.95×106个/mL，使用红光灯管照射培养，强度为1500‑2000lux, 加入茉莉酸甲酯，25℃静止培养,直至斜生栅藻培养到对数生长期；S5、藻种诱导培养：将对数生长期的斜生栅藻的培养温度提高到32‑37℃，在蓝光灯管照射下, 提高光照强度到7500‑7700lux进行诱导培养，光暗周期为21h：3h的培养架中培养，添加葡萄糖和木糖到培养基中使葡萄糖和木糖浓度分别达到8‑12g/L和27.0‑37.0g/L，每天震荡摇瓶一次,培养15‑20天；S6、破坏叶绿素和藻体细胞破壁：取出S5中藻液离心去上清，收集藻体沉淀，在藻体沉淀中加入质量分数为2%‑4%的KOH溶液和18%‑20%的甲醇溶液破坏叶绿素8‑10min，离心收集沉淀，溶于灭菌水中，然后进行低温高压均质破壁处理或超声波破壁处理得到破壁后的藻体细胞；S7、类胡萝卜素萃取：将S6中破壁后的藻体细胞中加入冰浴过的质量分数为75%‑90%的乙醇溶液进行类胡萝卜素提取，料液比为 1:4.2，料液比单位为mg/mL，提取时间为冰浴40‑50min，重复提取次数 2‑3 次，直至藻体变白，过滤并收集类胡萝卜素提取液；S8、类胡萝卜素干品制备：将S7中的类胡萝卜素提取液经过蒸去溶剂、浓缩、结晶、真空干燥后得到类胡萝卜素干品。