[发明专利]靶向沉默KLF4基因的重组腺相关病毒的构建方法在审
| 申请号： | 201810419441.3 | 申请日： | 2018-05-04 |
| 公开（公告）号： | CN109706178A | 公开（公告）日： | 2019-05-03 |
| 发明（设计）人： | 孙得胜;刘虹延;欧阳瑶 | 申请（专利权）人： | 遵义医学院附属医院 |
| 主分类号： | C12N15/864 | 分类号： | C12N15/864;C12N15/65;A01K67/027 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 李余江 |
| 地址： | 563099 贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了靶向沉默KLF4基因的重组腺相关病毒的构建方法，该方法先根据大鼠KLF4基因序列，设计针对大鼠特异性的siRNA序列，以pHBAAV‑U6‑MCS‑CMV‑EGFP作为空白载体，通过酶切技术构建带有GFP荧光标记的KLF4干扰腺病毒载体pHBAAV‑r‑KLF4shRNA‑GFP，进行测序分析；然后将重组质粒pHBAAV‑r‑KLF4shRNA‑GFP、包装质粒pAAV‑RC和辅助质粒pHelper共转染AAV‑293细胞，收获重组腺相关病毒rAAV1‑KLF4‑shRNA。该方法构建的靶向沉默KLF4基因的重组腺相关病毒能够在预防或治疗肺动脉高压的药物学中得到应用。 | ||
| 搜索关键词： | 重组腺相关病毒 靶向 构建 大鼠 药物学 治疗肺动脉高压 腺病毒载体 包装质粒 测序分析 辅助质粒 技术构建 空白载体 荧光标记 重组质粒 共转染 酶切 细胞 收获 预防 应用 | ||
【主权项】：
1.一种靶向沉默KLF4基因的重组腺相关病毒的构建方法，其特征在于包括以下步骤：S1.根据大鼠KLF4基因序列，设计针对大鼠特异性的siRNA序列，以pHBAAV‑U6‑MCS‑CMV‑EGFP作为空白载体，通过酶切技术构建带有GFP荧光标记的KLF4干扰腺病毒载体pHBAAV‑r‑KLF4 shRNA‑GFP，进行测序分析；S2.将重组质粒pHBAAV‑r‑KLF4 shRNA‑GFP、包装质粒pAAV‑RC和辅助质粒pHelper共转染AAV‑293细胞，收获重组腺相关病毒rAAV1‑KLF4‑shRNA。
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