[发明专利]葱属主要蔬菜作物叶绿体DNA提取方法及其质量评价体系的建立有效
申请号: | 201810421963.7 | 申请日: | 2018-05-04 |
公开(公告)号: | CN108531477B | 公开(公告)日: | 2020-07-14 |
发明(设计)人: | 霍雨猛;吴雄;杨妍妍;刘冰江;高莉敏;孔素萍;杨宁;孙雨晴 | 申请(专利权)人: | 山东省农业科学院蔬菜花卉研究所 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12N15/11;C12Q1/6895 |
代理公司: | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人: | 王志坤 |
地址: | 250100 山东*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | 本发明公开一种葱属主要蔬菜作物叶绿体DNA提取方法及其质量评价体系的建立,通过采用试剂优化后的高盐低pH值法,与蔗糖DNase法对比,对他们进行叶绿体DNA提取测试,结果表明,高盐低pH法优于蔗糖DNase法。此外,通过叶绿体DNA含量的荧光定量比值评价体系,评估了高盐低pH法和蔗糖DNase法对大葱叶绿体DNA含量提取效果,随后我们用高盐低pH法对葱属蔬菜作物的洋葱、大蒜和韭菜进行了测试,获得了预期的效果。本发明的DNA提取方法DNA产率高;纯度高,没有多糖、蛋白质等杂质的污染;叶绿体DNA的含量高,为进一步提取无核污染的高纯度叶绿体DNA以及细胞器全基因组测序奠定了基础。 | ||
搜索关键词: | 葱属 主要 蔬菜 作物 叶绿体 dna 提取 方法 及其 质量 评价 体系 建立 | ||
【主权项】:
1.一种葱属主要蔬菜作物叶绿体DNA提取方法,其特征在于:(1)将新鲜叶片黑暗处理后洗净、剪碎,放入匀浆器内并加入Buffer I匀浆;(2)过滤匀浆,离心;(3)上述离心所得上清液过滤,再离心,弃上清,保留沉淀,即得粗体叶绿体;(4)沉淀中加入Buffer II,悬浮定容,离心,保留沉淀。(5)沉淀中加入Buffer III,悬浮,离心,保留沉淀,即为纯化的叶绿体;所述Buffer I(pH 3.8):0.5‑2mol/L NaCl,0.25mol/L ascorbic acid,10mmol/L sodium metabisulfite,0.0125mol/L Borax,50mmol/L Tris‑HCl(pH 8.0),7mmol/L EDTA,1%PVP‑40,0.1%BSA;所述Buffer II(pH 8.0):0.5‑2mol/L NaCl,0.0125mol/L Borax,1%PVP‑MatK40,50mmol/L Tris‑HCl(PH 8.0),25mmol/L EDTA,0.1%BSA;所述Buffer III:0.5‑2mol/L NaCl,100mmol/L Tris‑HCl(PH 8.0),50mmol/L EDTA,10mmol/Lβ‑Me。
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