[发明专利]一种鸡胚原始生殖细胞的3D培养方法

摘要

本发明公开了一种鸡胚原始生殖细胞的3D培养方法，其包括以下步骤：1)将采集得到的14HH鸡胚血液置入cPGCs完全培养基中培养，纯化细胞；2)将纯化后的鸡胚原始生殖细胞重新置入cPGCs完全培养基进行体外培养扩增，取传代至二代的细胞，并离心获得鸡胚原始生殖细胞沉淀；3)将海藻酸钠溶液添加到沉淀中；4)用短针头胰岛素注射器吸取细胞悬液，滴加到含有CaCl2溶液的培养皿中形成海藻酸钠水凝胶球，静置15min再培养。本发明通过将海藻酸钠引入到培养条件中，使得该3D细胞培养模式很好地模拟鸡胚原始生殖细胞的体内生长环境，有利于大量获得鸡胚原始生殖细胞，从而有利于鸡胚原始生殖细胞在研究以及生产中的应用。

主权项

1.一种鸡胚原始生殖细胞的3D培养方法，其特征在于包括以下操作步骤：1)将采集得到的14HH鸡胚血液置入cPGCs完全培养基中培养，原代培养10～15d即可纯化细胞；2)将纯化后的鸡胚原始生殖细胞重新置入cPGCs完全培养基进行体外培养扩增，取传代至二代的细胞，并通过离心获得鸡胚原始生殖细胞沉淀；3)将海藻酸钠溶液添加到步骤2)的鸡胚原始生殖细胞沉淀中，得混合液；4)用短针头胰岛素注射器吸取步骤3)所得混合液中的细胞悬液，滴加到含有CaCl2溶液的培养皿中形成海藻酸钠水凝胶球，静置15min待凝胶微球成形后弃去CaCl2溶液，后加入PBS溶液清洗，再加入1ml cPGCs完全培养基中于37℃、5％CO2浓度的环境条件下培养。