[发明专利]一种采用氯化胆碱和尿素制作的深度共熔溶剂提取辣木籽多糖的方法

摘要

本发明公开了采用氯化胆碱和尿素制作的深度共熔溶剂提取辣木籽多糖的方法，包括深度共熔溶剂的制备，辣木籽的预处理，辣木籽多糖的提取，辣木籽多糖的粗纯化，总多糖含量的测定，蛋白含量的测定，DEAE‑52柱层析纯化，得到多糖样品。本发明具有可操作性强，工艺简便，成本低，易获取，总多糖的提取率高等优点。同时，深度共熔溶剂制作简单，起始物质可再生、可降解，广泛存在于自然界。

主权项

1.一种采用氯化胆碱和尿素制作的深度共熔溶剂提取辣木籽多糖的方法，其特征包括以下步骤：(1)深度共熔溶剂的制备：将置于真空干燥箱中干燥后的氯化胆碱和尿素以1:2的摩尔比混合，室温研磨直至得到均一稳定的液体，即深度共熔溶剂；(2)原材料的处理：选取完好的辣木籽，去壳，50‑70℃条件下干燥2‑3d后粉碎过60目筛，得到辣木籽细粉；(3)辣木籽多糖的提取：准确称取10g步骤(2)辣木籽细粉与100mL步骤(1)深度共熔溶剂混合，置于50‑70℃恒温水域锅、240r/min转速下磁子搅拌20‑40min，混合物使用高速冷冻离心机12000r/min下离心10‑15min分离固体颗粒，取上清液备用；(4)辣木籽多糖的脱蛋白：取步骤(3)制得的上清液置于冰水中加入3％‑5％TCA搅拌10‑15min后4℃冰箱静置4‑5h，NaOH调pH至中性，重复操作2次得到除去蛋白质的辣木籽多糖上清液；(5)辣木籽多糖醇沉：取步骤(4)制得的除蛋白的辣木籽多糖上清液加入4倍体积85％的乙醇，4℃下静置过夜，取上清液；(6)浓缩干燥：收集步骤(5)制得的上清液真空浓缩至原来的1/5，浓缩液冷冻干燥12‑24h得到辣木籽粗多糖；(7)总多糖含量的测定：对步骤(6)制得的辣木籽粗多糖采用考马斯亮蓝法测定；(8)蛋白含量的测定：再对步骤(7)的辣木籽粗多糖采用苯酚‑硫酸法测定；(9)DEAE‑52柱层析纯化：将步骤(8)的辣木粗多糖配置成10mg/mL的溶液过DEAE‑52柱，用0‑0.5mol/L NaCl溶液进行洗脱，收集洗脱液进行浓缩干燥，即得到辣木籽多糖。