[发明专利]基于铝-普鲁士蓝自供能电化学传感器构建的免疫分析方法

摘要

本发明公开了一种基于铝‑普鲁士蓝自供能电化学传感器构建的免疫分析方法，其是先制备普鲁士蓝修饰电极，再将其和铝电极、数字万用表、反应池串联构建成所述自供能电化学传感器，再将葡萄糖氧化酶和抗体共同负载在纳米金颗粒上形成酶标纳米探针，再在酶标板上将其与待测样品形成免疫夹心结构，利用该免疫夹心结构使葡萄糖催化生成大量过氧化氢，再将过氧化氢注入自供能电化学传感器中，通过其对普鲁士蓝的氧化能够显著改变普鲁士蓝的颜色及传感器的电流信号，从而通过读取产生的电流值，或观察普鲁士蓝的颜色变化来测定目标物的浓度。本发明方法设备简单，便于携带，并可用于多种抗体的检测，为便携式检测提供了一种简单、灵敏且稳定的方法。

主权项

1.一种基于铝‑普鲁士蓝自供能电化学传感器构建的免疫分析方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：（1）普鲁士蓝修饰电极的制备：将洗净的FTO玻璃电极、铂丝电极和饱和甘汞电极分别作为工作电极、对电极和参比电极，置于含有0.01‑0.5 mol/L HCl、0.01‑0.5 mol/L KCl、0.1‑10 mmol/L K₃[Fe(CN₆)]、0.1‑10 mmol/L FeCl₃的电解质中，在0.1‑0.6 V的恒电压下电聚合300‑400秒，然后用水洗涤、干燥，制得普鲁士蓝修饰电极；（2）铝‑普鲁士蓝自供能电化学传感器的构建：将步骤（1）制得的普鲁士蓝修饰电极、铝电极、数字万用表串联及两电极间的一小型检测池串联，制得所述铝‑普鲁士蓝自供能电化学传感器；（3）葡萄糖氧化酶和抗体共同负载的纳米探针的制备：将葡萄糖氧化酶和抗体依靠静电吸附作用负载在纳米金颗粒上，制得酶标纳米探针；（4）抗体‑抗原‑抗体夹心型免疫复合物的形成：在高亲和力的96孔聚苯乙烯微孔板中加入30‑80 μL抗体，过夜封闭，再依次加入30‑80 μL目标物、30‑80μL酶标纳米探针形成抗体‑抗原‑抗体夹心型免疫复合物；（5）采用铝‑普鲁士蓝自供能电化学传感器进行检测：将所得抗体‑抗原‑抗体夹心型免疫复合物用磷酸缓冲溶液洗涤后，加入50‑150 μL、pH=6的含50 mmol/L葡萄糖的磷酸缓冲液进行反应，然后将反应液注入到铝‑普鲁士蓝自供能电化学传感器中，25 s后读取数字万用表上的电流信号，或者直接观察普鲁士蓝电极的颜色变化来测定目标物的浓度。